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正確操作胎牛血清來避免沉淀的生成

時間:2023/8/16閱讀:107
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   胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。
  牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
  胎牛血清無沉淀生產(chǎn)法則:
  胎牛血清在使用的時候有時會出現(xiàn)一定的沉淀,這個沉淀的生成有時是正常現(xiàn)象,有時則是胎牛血清質(zhì)量產(chǎn)生變化的標(biāo)志,這個時候就需要正確的操作來避免沉淀的生成。
  (1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
  (2)血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
 ?。?)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
  (4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。
 ?。?)胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
  (6)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
  保存應(yīng)該注意以下幾點(diǎn):
  (1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.
  (2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化.
  (3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.
  (4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清.
  (5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染.一般情況下,此小黑點(diǎn)不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清.
  (6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量.

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