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談談培養(yǎng)基制備過程中常用的8個步驟

時間:2023/8/16閱讀:96
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   培養(yǎng)基是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。下面我們談談培養(yǎng)基制備過程中常用的8個步驟:
  不同類型的培養(yǎng)基制備程序也不同,主要可分為:配料、溶化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及檢定8個步驟。
  1,配料:按培養(yǎng)基處方準確稱取各種成分,先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水,再加入各種成分,以防蛋白胨等粘附于瓶底,然后再以剩余的水沖洗瓶壁。
  2,溶化:將各種成分混勻于水中,最好以流通蒸氣溶化半小時,如在電爐上溶化應隨時攪拌,如有瓊脂成分時更應注意防止外溢。溶化完畢,補足失去的水分。
  3,矯正pH:pH測定,取與標準管同口徑的試管(通常用華氏試管)3支,于第1、3管各加入欲測定pH的的培養(yǎng)基5ml,并于第一管中加入0.2g/L的酚紅0.25ml作為測定管,混勻醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理;于第2管加入蒸餾水5ml,第4管為pH標準比色管。 pH的校正,若測定管過酸或過堿可用0.1mol/L氫氧-化鈉或0.1mol/L鹽酸溶液矯正,直至顏色與標準管相同為止,加堿或加酸時要精確緩慢,每加1滴后要充分混勻,比色后再加第2滴(有時僅加半滴)準確記錄加入的量。 計算,設5ml培養(yǎng)基矯正pH至7.4時需0.1mol/L氫氧-化鈉0.15ml,現(xiàn)有培養(yǎng)基4990ml,需加氫氧-化鈉的量可按下列方法計算:5∶4990=0.15∶X  X=0.15×4990/5=149.7(ml),如將此0.1mol/L的氫氧-化鈉改用1mol/L的氫氧-化鈉時,則需14.9ml即可。
  4,過濾澄清:培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn),需過濾成清晰透明后方可使用,常用的過濾方法如下:
  液體培養(yǎng)基必須清晰,以便觀察細菌的生長情況,常用濾紙過濾,亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白(1000ml培養(yǎng)基用1個雞蛋白)在100℃加熱后保持60~70℃40~60分鐘,使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀,然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾。固體培養(yǎng)基如系瓊脂培養(yǎng)基,于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾;亦可用
  自然沉淀法,即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi),以高壓(103.43kPa)蒸汽融化15分鐘后,靜置高壓鍋內(nèi)過夜,次日將瓊脂傾出,用刀將底部沉渣切去,再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基。
  5,分裝:根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于不同容量的三角燒瓶、試管中。分裝的量不宜超過容器的2/3以免滅菌時外溢。瓊脂斜面分裝量為試管容量的1/5,滅菌后須趁熱放置成斜面,斜面長約為試管長的2/3。半固體培養(yǎng)基分裝量約為試管長的1/3,滅菌后直立凝固待用。高層瓊脂分裝量約為試管的1/3,滅菌后趁熱直立,待冷后凝固待用。液體培養(yǎng)基分裝于試管中,約是試管長度的1/3。瓊脂平板:將滅菌(或加熱融化)后的培養(yǎng)基冷至50℃左右,以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi),內(nèi)徑9cm的平皿傾注培養(yǎng)基約13~15ml,輕搖平皿底醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理,使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部,待凝固后即成,傾注時,切勿將皿蓋全部啟開,以免空氣中塵埃及細菌落入。新制成的平板培養(yǎng)基(簡稱平板),表面水分較多,不利于細菌的分離,通常應將平皿倒扣擱置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約30分鐘待平板平面干燥后使用。
  6,滅菌:不同成分、性質(zhì)的培養(yǎng)基,可采用不同的滅菌方法。高壓蒸汽滅菌法:高壓滅菌的溫度與時間隨種類及數(shù)量的不同有所差別,一般少量分裝時高壓(103.43kPa)滅菌15分鐘即可,分裝量較大時,可高壓(103.43kPa)滅菌30分鐘,含糖的培養(yǎng)基高壓(55.16kPa)滅菌15分鐘。以免糖類被破壞。
  7,檢定:每批制成后須經(jīng)檢定方可使用,檢定時將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時后,證明無菌,同時用已知菌種檢查在此培養(yǎng)基上生長繁殖及生化反應情況,符合要求者方可使用。
  8,保存:制好的培養(yǎng)基,不宜保存過久,以少量勤做為宜。每批應注明名稱,分裝量,制作日期等,放在4℃冰箱內(nèi)備用。
 

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