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怎么選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢?

閱讀:1101      發(fā)布時(shí)間:2023-11-9
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轉(zhuǎn)染是將外源性核酸(DNA或RNA)采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入細(xì)胞,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞基因功能的蛋白質(zhì)表達(dá)研究。生成重組蛋白,或特異性地增強(qiáng)或抑制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的基因表達(dá)是轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的主要目的。因此,轉(zhuǎn)染是一種功能強(qiáng)大的分析工具,可用于基因或基因產(chǎn)物的功能和調(diào)控研究,用于生成轉(zhuǎn)基因生物,并可用作基因治療方法。常規(guī)的轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,么選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢?


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選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染還是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,具體取決于您要開展的實(shí)驗(yàn)的時(shí)間范圍和最終目標(biāo)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞一般在轉(zhuǎn)染后24-96小時(shí)收集,常用于研究基因或基因產(chǎn)物的短期表達(dá)效應(yīng),執(zhí)行RNA干擾(RNAi)介導(dǎo)的基因沉默,或快速生成小量重組蛋白。相比之下,當(dāng)需要長(zhǎng)期基因表達(dá)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞需在多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中使用時(shí),則更多地選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。由于將DNA載體整合至染色體中的概率較低,細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染更麻煩、更具挑戰(zhàn)性,需要選擇性篩選和克隆分離。因此,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通常用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)生產(chǎn)、長(zhǎng)期藥理學(xué)研究、基因治療或長(zhǎng)期基因調(diào)控機(jī)制研究。

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

外源基因保留在細(xì)胞核內(nèi),不整合到基因組中

外源基因整合到基因組中

外源基因不傳給子代,遺傳改變是暫時(shí)的

外源基因代代相傳,遺傳改變是長(zhǎng)久的

瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性

穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便選擇性篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆株

DNA、RNA都可用于瞬轉(zhuǎn)

只有 DNA可用于穩(wěn)轉(zhuǎn),RNA 本身不能穩(wěn)定導(dǎo)入細(xì)胞

操作簡(jiǎn)單,構(gòu)好質(zhì)粒經(jīng)細(xì)胞復(fù)蘇、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白

需先將構(gòu)好的質(zhì)粒線性化,再導(dǎo)入細(xì)胞,經(jīng)過篩選、細(xì)胞傳代等步驟才能得到穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系

周期短,快速產(chǎn)生高表達(dá)目的蛋白

周期長(zhǎng),需要 2~3 周篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株,蛋白表達(dá)水平低

無法長(zhǎng)期生產(chǎn)得到重組蛋白

能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定生產(chǎn)目的蛋白

實(shí)驗(yàn)成本低

實(shí)驗(yàn)成本高,得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株后再生產(chǎn)蛋白成本大大降低





































本期內(nèi)容:么選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢?

下期內(nèi)容:ELISA實(shí)驗(yàn)的具體步驟



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