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ELISA實驗的具體步驟

閱讀:1593      發(fā)布時間:2023-11-13
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酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。ELISA是分子生物學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中常用到的實驗操作之一,一起來了解一下ELISA實驗的具體步驟吧!

1. 涂覆:將待檢測的抗原或抗體溶液加入到微孔板(通常是96孔板)中,并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個過程被稱為涂覆。

2. 阻斷:為了防止非特異性結(jié)合,需要在涂覆后加入一種阻斷劑,例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉,以覆蓋孔板上未被固定的表面。阻斷劑可以減少非特異性結(jié)合和降低背景信號。

3. 樣品加入:將待測樣品加入到微孔板中,樣品中的目標(biāo)抗原或抗體與固定在孔板上的抗體或抗原相互作用。

4. 洗滌:通過反復(fù)洗滌孔板,去除未結(jié)合的物質(zhì),以減少背景信號。

5. 探針加入:加入與待測物體特異性結(jié)合的酶標(biāo)記二抗(例如辣根過氧化物酶-HRP)或酶標(biāo)記抗原,使其與樣品中的目標(biāo)物體結(jié)合。

6. 洗滌:再次洗滌孔板,去除未結(jié)合的酶標(biāo)記物。

7. 底物加入:加入一種底物,其與酶標(biāo)記物相互作用,產(chǎn)生可測量的信號。常用的底物是一種可被酶催化產(chǎn)生顏色或熒光的物質(zhì)。

8. 反應(yīng)停止:通過加入一種停止劑,停止底物的反應(yīng),阻止信號進(jìn)一步增加。

9. 信號測量:使用光譜儀或熒光測量儀測量底物反應(yīng)產(chǎn)生的信號,根據(jù)信號的強(qiáng)度來確定樣品中目標(biāo)物體的濃度。

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