HIV-1 p24 ELISA  檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

貨號(hào)： HG-P001

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本品采用雙抗夾心法檢測(cè)樣本中 HIV-1 p24蛋白，將HIV-1 p24特異性單克隆抗體預(yù)包被在微孔板上，將標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣本加入到已包被的反應(yīng)孔內(nèi)進(jìn)行孵育。存在的 HIV-1 p24 蛋白會(huì)定量的與微孔板中的抗體結(jié)合，洗滌除去未結(jié)合物，加入生物i素標(biāo)記的抗p24 抗體，最后加入親和素標(biāo)記 HRP，形成抗體-抗原-生物i素抗體-酶標(biāo)親和素復(fù)合物，通過(guò)TMB顯色程度指示樣品中蛋白含量。使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)并檢查試劑盒組分。
檢測(cè)范圍： 6.25 - 200 pg/mL
定  量  限： 6.25 pg/mL
檢  測(cè)  限： 3.125 pg/mL
精  密  度： CV%≤10%  RE%≤±15%

規(guī)格：

96T

應(yīng)用：

適用于快速檢測(cè)任何基于HIV-1的慢病毒的p24蛋白含量測(cè)定。

試劑盒組成：

備 注:檢測(cè)抗體、酶結(jié)合物、標(biāo)準(zhǔn)品和 20% CS Buffer -20℃保存，其他組分 2~8℃避光保存，有效期 12 個(gè)月。

需自行準(zhǔn)備的材料

◆酶標(biāo)儀

◆去離子水

◆恒溫培養(yǎng)箱

◆全新濾紙

◆微量加液器及吸頭

◆渦旋振蕩器

試劑配制

1.平衡：將所需試劑移到室溫（18~25℃）平衡30分鐘。
2.配液：
①1×PBST洗滌液：計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需工作液體積，取適量20×PBST洗液，用去離子水1：19稀釋稀釋?zhuān)靹蚝髠溆谩?br/>②檢測(cè)抗體及酶結(jié)合物工作液:計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需工作液體積，取適量生物i素抗體或酶潔合物用 20% CS Buffer1：99稀釋?zhuān)浞只靹騻溆谩?br/>③準(zhǔn)品及樣品使用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋。
3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋:標(biāo)準(zhǔn)品第一個(gè)中間梯度（Pre-1）-20°C可存放 1-7 天。

操作步驟

1.使用前，將所有試劑充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)孔數(shù)量，確定所需的板條數(shù)目，剩余板條放回含干燥劑的鋁箔袋，密封。
3. 加樣：每孔加入10uL 裂解液，再加入90uL 標(biāo)準(zhǔn)品、樣品稀釋工作液、陰性對(duì)照至相應(yīng)孔中。用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱，200-300rpm，溫育60分鐘。
4. 洗滌：棄去各孔內(nèi)液體，用1XPBST洗滌液注滿(mǎn)微孔（300μL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內(nèi)液體；重復(fù)3次，每一次洗板完成后在濾紙上拍干。
5. 加生物i素檢測(cè)抗體工作液：每孔加生物i素檢測(cè)抗體工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱，200-300rpm，溫育 60 分鐘。
6. 洗滌：棄去各孔內(nèi)液體，用1XPBST洗滌液注滿(mǎn)微孔（300uL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內(nèi)液體；重復(fù)3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
7. 加酶結(jié)合物工作液: 每孔加酶結(jié)合物工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱，200-300rpm，溫育 60分鐘。
8. 洗滌：棄去各孔內(nèi)液體，用1XPBST洗滌液注滿(mǎn)微孔（300uL/孔），靜置 30 秒后棄去孔內(nèi)液體；重復(fù)3次，每一次洗板完成后在面巾紙上拍干。
9. 顯色：每孔分別加底物顯色液A50uL，底物顯色液B50uL，輕微振蕩混勻后用封板膜封板置 25℃避光顯色 10 分鐘。
10. 測(cè)定：每孔加終止液50uL，輕微混勻。選擇酶標(biāo)儀主波長(zhǎng)450nm，參考波長(zhǎng)630nm，測(cè)定各孔吸光值（OD 值）。

結(jié)果處理

本產(chǎn)品建議采用四參數(shù)的擬合方式進(jìn)行線(xiàn)性擬合及計(jì)算。
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)OD處理（見(jiàn)下例，僅為示例，具體以實(shí)際測(cè)定為準(zhǔn)）

2. 以標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度與對(duì)應(yīng)OD值進(jìn)行四參數(shù)擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（如下圖所示）

檢驗(yàn)方法的局限性

本試劑僅用于檢測(cè)樣本中 P24 蛋白組分的含量。

注意事項(xiàng)

1. 若檢測(cè)具有極i高水平p24 蛋白的樣本。含有高水平 p24（即>200pg/mL）的樣品必須在測(cè)定前進(jìn)行稀釋?zhuān)垣@得準(zhǔn)確的p24 值。這類(lèi)樣本可能包括慢病毒上清，通常慢病毒粗毒液建議稀釋 5000-40000 倍，成品建議稀釋 40000-160000倍。首i次檢測(cè)建議進(jìn)行至少3個(gè)連續(xù)倍數(shù)的稀釋?zhuān)栽跇?biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍內(nèi)產(chǎn)生至少一個(gè)稀釋后樣品。在進(jìn)一步分析或稀釋前，需充分混合稀釋液。每份樣品重復(fù)分析兩次，以確定原始樣品中正確的 p24 值。
2. 試劑按標(biāo)簽說(shuō)明儲(chǔ)存，使用前室溫（18~25℃）平衡。
3. 預(yù)包被酶標(biāo)板使用前，請(qǐng)平衡至室溫（18~25℃）再打開(kāi)外包裝袋，實(shí)驗(yàn)中不用的板條立即放回包裝中密封，4℃可保存一個(gè)月。其余不用試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
4. 標(biāo)準(zhǔn)品、生物i素及酶結(jié)合物體積量很小，使用前請(qǐng)短暫離心，以使管壁或管蓋的液體沉積到管底。
5. 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
6. 使用前檢查試劑盒內(nèi)各種試劑。試劑稀釋、加樣和終止反應(yīng)應(yīng)充分混勻或搖勻?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果尤為重要。
7. 洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在潔凈的紙巾上充分拍干，直至看不到水印。勿將紙巾直接放入反應(yīng)孔中吸水。
8. 底物顯色液對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，避免與金屬接觸影響結(jié)果。
9. 本產(chǎn)品為一次性使用的試劑盒，請(qǐng)?jiān)谛趦?nèi)使用。

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