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目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>常規(guī)試劑>>試劑>> A3831-06HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑
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參考價(jià) 1750
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
1750
≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 雅吉生物
  • 型號(hào) A3831-06
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時(shí)間:2024-10-31 18:36:23瀏覽次數(shù):428評價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100Tx25μl
貨號(hào) A3831-06 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合
主要用途 科研實(shí)驗(yàn)
HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑,雅吉生物是一家生物企業(yè)主營ATCC細(xì)胞,細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑該制品為全體系凍干微球制品,包含了 HotStart

Bst4.2 DNA/RNA 聚合酶、Helicaser、dNTP、Mg2+、反

應(yīng)緩沖、L-HNB 變色指示劑(Leuco-HNB, 隱色 HNB 染

料),其它穩(wěn)定劑。

Bst4.2 具有以下性能:(1)Bst 4.2 全系包含熱啟動(dòng)

Aptamer,該配體確保酶在<30℃時(shí),酶活封閉效率>95%,

在>60℃時(shí) 1min 內(nèi)釋放酶活。該特性利于室溫建立反

應(yīng)體系,并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增;(2)反

應(yīng)溫度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高

擴(kuò)增特異性,并使得粗樣品核酸釋放更加充分;(3)全系

包含 Helicaser,因此,允許在不使用 F3/B3 引物的情況下

進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增(easy LAMP),并允許 FIP/BIP 的引物

用量降低一倍。這將進(jìn)一步降低非特異擴(kuò)增,并使得擴(kuò)增

均一性大幅提升。

制品中的 L-HNB 染料在反應(yīng)起始前與 Mg2+結(jié)合產(chǎn)

生深紫羅蘭色,隨著 LAMP 反應(yīng)的進(jìn)行,產(chǎn)生的 PPi(無

機(jī)焦磷酸鹽)結(jié)合體系中的 Mg2+,使得 L-HNB 顯示出

淡綠色。

(L-HNB-Mg2+復(fù)合物) -> (PPi-Mg2+)+ (L-HNB)

 深紫羅蘭色 淡綠色

名 稱 100T

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 100 個(gè)

儲(chǔ)存:-20℃干燥密封保存 24 個(gè)月;室溫(25℃)密封保

存 12 個(gè)月。避免受潮。

特殊說明:

(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴(kuò)增時(shí)

的推薦反應(yīng)溫度為 65-70℃,最佳反應(yīng)溫度為 70℃。因此

其可替代 HaiGene 的 Bst4.0 系列,用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP

的擴(kuò)增。

(2) 由于 Helicaser 的反應(yīng)溫度為 70℃,因此在進(jìn)行

eLAMP 擴(kuò)增時(shí),反應(yīng)溫度為 70℃。

(3)制品中包含高濃度的鹽組分,使用時(shí)做好個(gè)人防護(hù),

防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入,一旦接

觸或吸入,請用大量的清水沖洗。

(4)防止氣溶膠污染,盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。

1. 標(biāo)準(zhǔn) LAMP 和 eLAMP 擴(kuò)增的區(qū)別

本試劑既可以用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴(kuò)增,也可以用于 eLAMP

擴(kuò)增。

1.1 10x 標(biāo)準(zhǔn) LAMP Primer Mix

FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each

1.2 10xeLAMP Primer Mix

FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each

注意:eLAMP(easy LAMP)為去除 F3/B3 引物的方法,

為 Bst4.2 系列專用的使用策略,對于大多數(shù)引物組,在

Helicaser 的加持下,擴(kuò)增速度幾乎不受影響。如引物擴(kuò)

增效率低,可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16 μM。

1.3 擴(kuò)增溫度不同

標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴(kuò)增 eLAMP 擴(kuò)增

65-70°C 均可 70°C 反應(yīng)

2. 配制 LAMP 反應(yīng)體系

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 1 個(gè)

10x Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

反應(yīng)體系配好后,置于 65-70°C 反應(yīng) 20~30min,反應(yīng)完

畢后觀察顏色,紫色為陰性,綠色為陽性擴(kuò)增。

注意事項(xiàng):

(1)本制品在 1x 濃度情況下,對如下試劑的耐受度,

Tris-HCl(pH8.0)≦10 mM; NaOH≦1 mM; Tween20%

≦1%; EDTA(pH8.0) ≦20 μM; 肝素≦0.5 IU/ml。

(2)L-HNB 是還原狀態(tài)下的染料,任何強(qiáng)氧化劑(H2O2、

次氯酸鈉等)均會(huì)破壞 L-HNB 的結(jié)構(gòu),從而直接導(dǎo)致試

劑變?yōu)樯钏{(lán)綠色。

恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果,可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

b852504c757107ec2ac02ece1e368206.jpg

應(yīng)用實(shí)例2: 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,在反應(yīng)結(jié)束后,倒置反應(yīng)管,溶解管蓋上染料后,陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,陰性表現(xiàn)出橙色,區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

df4b81f9bdbb2186b3e42fc1967fdf6b.jpg

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