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熱穩(wěn)定無(wú)機(jī)焦磷酸酶試劑純化自重組 E. coli 菌株，攜帶從極度耐熱的 Thermococus litoralis 中克隆的無(wú)機(jī)焦磷酸酶基因。

該焦磷酸酶催化無(wú)機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽。 P207–4 + H20 →2HP04–2。該酶在100℃加熱4h仍然具有100%活性，

因此可用于PCR反應(yīng)，解除生成的無(wú)機(jī)焦磷酸鹽對(duì)PCR的抑制，增強(qiáng)DNA的復(fù)制。

組分

組分名稱數(shù)量

Thermostable Inorganic Pyrophosphatase (2 U/μl)100 μl/1 ml

活性定義

1單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下：0.5ml反應(yīng)體系，50mM Tricine pH8.5，1mM MgCl2和0.32mM PPi，75℃反應(yīng)10 鐘，每分鐘催化

無(wú)機(jī)焦磷酸鹽生成1μmol 磷酸鹽的酶量。

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

（1） 該酶在多種反應(yīng)Buffer中均具有活性，通常該酶在tHDA擴(kuò)增、PCR、測(cè)序反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)中，可直接接入即可。

（2） 該酶的用量在不同的實(shí)驗(yàn)中需要優(yōu)化，通常在5~50U/ml濃度調(diào)整。

（3） 該酶不可以熱失活。

熱穩(wěn)定無(wú)機(jī)焦磷酸酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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