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上海語(yǔ)純生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員·1年EC96304GV3101感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- EC96304 產(chǎn)品型號(hào)
- 語(yǔ)純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：43更新時(shí)間：2025-04-24 09:40:43
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10 ×50ul/100×50ul |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | EC96304 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號(hào)：EC96304
產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。
產(chǎn)品介紹
GV3101感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，
此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基因
(vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移
功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質(zhì)粒含
有篩選標(biāo)簽：Gent，賦予 GV3101 菌株慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米等植物的轉(zhuǎn)基因
操作。本公司開發(fā)的 GV3101 電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng) pCAMBIA2301 質(zhì)粒
(size:11633 bp)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
GV3101
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 50μL
100 × 50μL
定制
基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥105cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷；或者將儲(chǔ)存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工
作臺(tái)中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預(yù)冷；
2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質(zhì)粒 DNA（體積不大于 5μl），用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；
3. 開啟電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后快速插
入冰中，加入 900μl 無(wú)抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無(wú)菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)。
（注：此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進(jìn)行操作）
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當(dāng)平板只含有 50μg/ml Kan 時(shí)，28 ℃培養(yǎng) 48h 即可；平板中同時(shí)
加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時(shí)，需 28 ℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時(shí)，則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72~90 h）。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 利福平濃度不應(yīng)高于 25μg/μl，利福平濃度過(guò)高不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。
4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。
GV3101感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）
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