目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T鹿源性成分(Deer)熒光PCR檢測試劑盒
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/盒 |
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貨號 | XY-D-0567 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Diagnostic Kit for Deer derived ingredients DNA |
保存條件 | -20℃±5℃,避光保存 | 有效期 | 12個月 |
產(chǎn)品簡介:
本試劑盒適用于動物組織以及食品、飼料等樣本中鹿源性成分的檢測。檢測結(jié)果僅供參考。
產(chǎn)品特點:
一、嚴(yán)格的質(zhì)控體系
所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,讓您的檢測結(jié)果更可信。
二、高靈敏度
產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化,具有出色的靈敏度,能夠檢測到極微量的鹿源性成分核酸,不放過任何潛在的感染風(fēng)險。
三、便捷操作
綜合各項指標(biāo)特性,研發(fā)出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結(jié)果分析,每一步都有清晰的操作指南,即使是新手也能輕松上手。
四、多樣的檢測驗證樣本
該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,適用于動物組織以及食品、飼料等多種常見樣本,滿足不同的檢測需求。
五、個性化定制服務(wù)
專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù),根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,為您提供更貼合實際的檢測方案。
六、豐富的產(chǎn)品線
除了鹿源性成分(Deer)熒光PCR檢測試劑盒,我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。
七、完善的售前售后服務(wù)
我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊,在您購買前為您提供詳細(xì)的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持,購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,讓您無后顧之憂。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品規(guī)格
50T/盒,可滿足一定規(guī)模的檢測需求。
檢測方法
實時熒光PCR,具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點。
適用儀器
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
標(biāo)本采集
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g,轉(zhuǎn)至含 1.5mL 無菌生理鹽水的潔凈離心管送檢。
保存和運輸
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月,標(biāo)本運送應(yīng)采用 0℃冰壺。
使用方法:
1.樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1參照 SN/T2980-2011 標(biāo)準(zhǔn)的提取方法,如下:
1.1.1試劑配置
1)1mol/L Tris-Cl(pH8.0):稱取 Tris 121.1g,加入 ddH2O 800mL 溶解,冷卻至室溫后弄 3M 濃鹽酸調(diào) PH 至 8.0,加 ddH2O 定容至 1L,分裝滅菌。
2)CTAB 裂解液:800mLddH2O 加入 40.95g NaCl,10g CTAB(十六烷基三甲基溴-化銨);完-全溶解后加入 1mol/L Tris-Cl(pH8.0)50mL,0.5mol/L EDTA
(pH8.0)20mL,磁力攪拌器劇烈攪動拌用氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 至 8.0,水定容至1L,分裝滅菌;
1.1.2DNA 提取
取 100mg 左右樣品于 1.5mL 離心管中,加入 600-800μL 預(yù)冷的 CTAB 裂解液, 65℃水浴 30min,每隔 10min,振蕩混勻一次;100℃沸水浴 5min;12000r/min離心 5min,吸取上清液至一新的離心管中,加 400μL 氯仿+異戊醇混合液(體積比 24:1),充分混勻后 12000r/min 離心 10min,吸取上清液至新的離心管中,加0.8 倍體積的異丙醇,-20℃下沉淀DNA 30min;12000r/min 離心10min,棄去上清液;75%乙醇輕柔地洗滌沉淀一次,12000r/min 離心 8min,棄液體, 晾干;加入 100μL 1xTE,充分溶解沉淀;
1.2核酸稀釋(油脂類飼料不必進行此步驟)
提取的 DNA 用紫外分光光度計進行濃度測定,取 5μL 提取好的 DNA,1mL ddH2O,用 ddH2O 做對照,測定 260nm 和 280nm 的吸光度 A260 和 A280,DNA 的濃度 c=A260x10μg/μL(當(dāng) A260/A280 比值在 1.7~1.9 之間時,DNA 模版純度適宜擴增)。
2.試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑Deer 反應(yīng)液酶液
用量20μL1μL
3.加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4.PCR 擴增(核酸擴增區(qū))
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇: 檢測通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿選擇ROX 參比熒光。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號
11 cycle95℃10min否
240 cycles94℃15sec否
55℃30sec是
結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
5.2判斷
a)檢測通道 Ct 值≤30,有 FAM 熒光信號檢出,并出現(xiàn)典型的擴增曲線,判斷樣品為陽性。
b)當(dāng) 30<Ct 值≤35 時,且有典型的擴增曲線時,則需重復(fù)實驗。再次擴增后檢測體系的Ct 值仍≤35,且有典型的擴增曲線,則判定該樣品含有相應(yīng)的動物源性成分。當(dāng)再次擴增后,檢測體系 Ct 值>35,或無典型的擴增曲線,則判定該樣品不含相應(yīng)的動物源性成分。
6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
a)空白對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35,未出現(xiàn)典型的擴增曲線。
b)陰性對照:無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35,未出現(xiàn)典型的擴增曲線。
c)陽性對照:有 FAM 熒光信號檢出,并出現(xiàn)典型的擴增曲線,Ct 值<30。
d)以上應(yīng)同時滿足,否則本次實驗無效。
7.檢測方法的局限性
7.1樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);
7.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
7.3陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
7.4病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
7.5不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
7.6試劑運輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;
7.7本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
注意事項:
1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進行;
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完-全混勻并短暫離心;
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。
9.本產(chǎn)品僅供科研。
選擇我們的鹿源性成分(Deer)熒光PCR檢測試劑盒,就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!
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