美國(guó)蘭博LBA800氨基酸分析儀檢測(cè)牛乳中非法添加的大豆蛋白

    隨著鮮牛乳的消費(fèi)量迅速增加，在純牛乳中非法添加大豆蛋白以提高蛋白質(zhì)含量從而獲得較高的經(jīng)濟(jì)效益，不僅降低了牛乳的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，也嚴(yán)重?fù)p害了廣大消費(fèi)者的利益。因此，檢測(cè)原料乳中摻入大豆蛋白對(duì)原料乳的質(zhì)量控制有重要意義。

    目前的乳品蛋白質(zhì)摻假檢測(cè)方法涉及了色譜、質(zhì)譜、免疫、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、電泳、光譜學(xué)、分析化學(xué)等技術(shù)領(lǐng)域。

    利用傳統(tǒng)的化學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)牛乳中的大豆蛋白，簡(jiǎn)單快速但只能定性不利于蛋白的定量檢測(cè)。

    通過(guò)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳中牛乳和大豆蛋白的條帶對(duì)比可檢測(cè)摻假量體積分?jǐn)?shù)5%的豆?jié){，凝膠電泳耗時(shí)較長(zhǎng)且檢出限較低。

    利用近紅外光譜法、液相色譜法以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等結(jié)合化學(xué)測(cè)定方法或質(zhì)譜法可以定性定量檢測(cè)牛乳中的大豆蛋白，但是檢測(cè)成本較高。

    美國(guó)蘭博天津應(yīng)用研發(fā)中心使用氨基酸分析儀，利用牛乳和大豆蛋白質(zhì)的氨基酸組成含量差異對(duì)牛乳中摻入的大豆蛋白進(jìn)行定性定量檢測(cè)，彌補(bǔ)了現(xiàn)有方法耗時(shí)長(zhǎng)檢測(cè)不靈敏的不足。

儀器與設(shè)備

LBA800型氨基酸分析儀及數(shù)據(jù)處理平臺(tái)—美國(guó)蘭博公司；

KQ-250B型超聲波清洗器

凱氏定氮裝置

高速冷凍離心機(jī)

均質(zhì)儀等

樣品處理

取2.5 mL液體樣品（0.100 g固體樣品）于水解管中加10 mL 6 mol/L鹽酸滴入正辛醇充氮后封管置于110 ℃烘箱中保持24 h，冷卻后經(jīng)濾紙過(guò)濾到50 mL容量瓶中用超純水反復(fù)沖洗水解管及濾紙zui后定容。取 1 mL的樣液于蒸發(fā)皿中在蒸氣浴上蒸干，然后加0.02 mol/L鹽酸2.5 mL溶解用針管過(guò)濾器過(guò)濾，備用上機(jī)。

色譜條件

熒光激發(fā)波長(zhǎng)338 nm；熒光發(fā)射波長(zhǎng)425 nm；柱溫62 ℃；反應(yīng)器35 ℃；進(jìn)樣量10 μL；流速0.4 mL/min；柱后泵流速0.4 mL/min；流動(dòng)相配制見(jiàn)表1，梯度洗脫程序見(jiàn)表2。

結(jié)果與分析

氨基酸標(biāo)樣的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍

檢測(cè)牛乳中摻入大豆蛋白的方法的建立

摻假牛乳中6 種氨基酸含量與大豆蛋白添加量的關(guān)系

假設(shè)隨著大豆分離蛋白在牛乳中添加量的增加，天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、精氨酸在牛乳中的含量也隨之增加。6 種氨基酸含量與大豆蛋白添加量都存在著一定的線性關(guān)系。

 利用氨基酸分析儀對(duì)牛乳、大豆、摻假樣品中17 種氨基酸進(jìn)行分析，方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度、重復(fù)性和穩(wěn)定性較好。

取自同牧場(chǎng)同品種乳牛的常乳樣品氨基酸圖譜相似，氨基酸組成和比例基本一致；不同廠家的大豆分離蛋白的氨基酸圖譜及含量差別不大，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)具有一定的區(qū)域代表性。不同的牛乳樣品通過(guò)模擬摻假實(shí)驗(yàn)，以摻假樣品中的6 種氨基酸（天冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、組氨酸、精氨酸）含量為橫坐標(biāo)以摻假的大豆分離蛋白占樣品總蛋白的百分比為縱坐標(biāo)得到線性方程y=0.061x＋6.586，R2=0.889重復(fù)性較好，即可通過(guò)樣品中特定氨基酸含量和推算出摻入大豆蛋白的比例，從而建立了純牛乳中大豆蛋白摻假的定量檢測(cè)方法，且大豆蛋白摻假量在總蛋白含量的1%以上時(shí)，此法就可有效地進(jìn)行檢測(cè)，方法簡(jiǎn)單，靈敏度高。本研究為牛乳中大豆蛋白的摻假檢測(cè)提供了創(chuàng)新方法，對(duì)更廣闊區(qū)域內(nèi)的牛乳和其他類蛋白質(zhì)摻假還有待進(jìn)一步的驗(yàn)證和探索。