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改善液相色譜基線噪音的方法(下)
前面三點講的都是內在原因造成的基線噪音或者波動。如果你前面的原因都找過了,問題還沒有解決,就得考慮一下是不是流動相里面有雜質了。
四、系統(tǒng)潔凈程度
如何檢查判斷是否是流動相問題?
a. 每次更換一種流動相,看基線結果。
b. 重新配置所有流動相。這種方式比較快,但可能無法找到根本原因。
要特別注意在流動相的配置過程中,是否引入了污染,比如使用了不干凈的玻璃器皿等。
c. 更換溶劑的品牌和批次也是方法之一。
色譜柱長期使用造成的污染有時候也會造成基線波動。
有些時候樣品里面可能有些保留非常強的組分,可能在色譜柱上很長時間才慢慢被沖出來,這時候已經(jīng)不是一個峰了,而是基線的干擾或者波動了。
避免這種問題的方法:在每次做樣后,用甲醇或者乙腈長時間沖洗色譜柱。
另外,專柱也是一個好的習慣。如果一根色譜柱上做很多不同的樣品,也可能導致互相之間的污染和影響。
五、電路的噪音
對于UV檢測器來說,就是采樣頻率不合適而產(chǎn)生的噪音。
現(xiàn)在隨著超液相的普及,檢測器的采樣頻率也越來越高,有的可以達到80Hz以上。但是如果一味追求高采樣頻率,可能對靈敏度沒有任何幫助,反倒產(chǎn)生比較大的噪音。
一般來說,我們需要保證一個色譜峰上面有15-20個點,來保證比較平滑的峰形和比較準確的定量結果。
如果我的一個峰的時間寬度是0.5min,就是是30s,那只要保證1Hz的采樣頻率就足夠了。
如果在UPLC上面,一個峰的時間寬度是0.05min,也就是3s,就需要10Hz以上的采樣頻率。
那80Hz的采樣頻率什么時候用呢?你的一個峰只有0.5s的時候用。
理論上的計算是這樣的:N=16(T/W)^2
N是柱效;T是保留時間;W是峰寬。
一般色譜如果柱效12000的塔板數(shù),在5min的時候,出峰寬度大概計算出來是11s。
你可以根據(jù)計算結果來調整檢測器合適的采樣頻率。
上面從理論到實踐,從各個方面分析了液相色譜基線噪音或者波動的來源,以及相應排除問題的方法,希望可以幫助到你。