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使用高效液相色譜儀時你知道應該怎樣操作嗎？
高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。
高效液相色譜儀的操作步驟：
1、色譜柱它包括空柱和填料?？罩莾缺趻伖獾牟讳P鋼管，內徑為4～5mm，長100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動相。等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷或甲醇：水為流動相測定柱效及分離度塔板數在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。
為防止柱污染，常用1個50mm長，4~5mm內徑，裝有硅膠或立柱相同填料的保護柱接在主柱之前，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經，以洗去鹽類、酸堿等雜質防止柱生銹及填料中雜質的積聚，再用甲醇流經洗滌使色譜柱獲得再生。
2、流動相的洗脫方式配好經脫氣的流動相放于貯液瓶中，經過有濾過頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進入色譜柱，后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法，即自洗脫開始到結束，溶劑的配比恒定。
另一類為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，從而使同一個試樣中組分性質相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離，而整個色譜過程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學檢測的反相液相色譜法中。
3、檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物，大多數藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。液相色譜儀有固定波長型、可變波長型及掃描器，既能使流動相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產生熒光的藥物才能使用。
光強度增加了3~4倍，對某些藥物的檢測限可達pg級。電化學檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團的各種藥物和代謝物。流出組分進入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產生電流，放大后檢測，檢測限pg級。
4、數據處理現代液相色譜儀帶有數據處理系統(tǒng)，除記錄譜外，還能自動記錄峰的保留時間，能自動積分求算峰面積，并能按照預定的程序作有關計算，報告分析結果。
高效液相色譜儀在條件(流動相、固定相、溫度和壓力等)一定，樣品濃度很低時(Cs、Cm很小)時，K只取決于組分的性質，而與濃度無關。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下，隨著濃度的增大，K減小，這時色譜峰為拖尾峰;而有時隨著溶質濃度增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進樣量，使組分在柱內濃度降低，K恒定時，才能獲得正常峰。