影響C18液相色譜柱性能的因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學(xué)性質(zhì)包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，在選擇之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。

 

　　下面要為大家介紹的是C18液相色譜柱的四大填裝方法：

 

　　1、壓勻漿法裝填

 

　　將填料懸浮在適宜的勻漿液中制成勻漿，在其尚未沉降之前，很快以高壓泵將其以很高的流速壓進(jìn)柱中，便可制備出填充均勻的柱子。這是常見的分析和制備色譜柱的裝填方法。

 

　　2、密度法裝填

 

　　在HPLC發(fā)展的早期，常采用“等密度法”來填裝柱。多孔硅膠的骨架密度較高。不同牌號的硅膠因制法不同而有差異，但多在2.2g/cm3以上。因此，需以高密度溶劑配制密度與硅膠骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶劑為碘代和溴代烷類，再與適當(dāng)比例的其他溶劑相配，配制出具有密度適宜的液體，使填料能呈“失重”狀態(tài)懸浮于勻漿液中，以從容地用高壓泵將其壓入空色譜柱中，制出填裝均勻的色譜柱。

 

　　3、法裝填

 

　　對于粒徑較大的填料，可以用干法裝填，其基本方法與填裝氣相色譜柱類似。但需注意的一點(diǎn)是，在干法填裝制備液相色譜柱時，不要過分劇烈地振動和敲打。振動和敲打會使填料因自身粒徑的不均勻性而產(chǎn)生柱子整體上的不均一性，即較大的填料粒子靠近柱壁，而較細(xì)粒徑者則傾向集中于柱中心。這種柱內(nèi)顆粒分布的不均勻性，會導(dǎo)致柱效的降低。比較好的方法是采用小量多次的方法向柱內(nèi)加入填料，例如每次加入相當(dāng)于3-5mm柱床的填料，裝一點(diǎn)即在實(shí)驗(yàn)臺或桌面上垂直地輕輕磕幾十下，續(xù)加一些填料后，重復(fù)上述操作，直至填裝完成。

 

　　4、粘度法裝填

 

　　高粘度法，即使用黏度較高的勻漿液體系以阻止顆粒的沉降。可以采用乙二醇、聚乙二醇、甘油以及石蠟油等高黏度液體調(diào)配勻漿液。但是，高黏度導(dǎo)致流體阻力加大，必將延長裝柱時間且需使用更高的裝柱壓力，在實(shí)用上很不方便。因此，高黏度法已很少被采用。