黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵（Abelmoschus manihot (L. ) Medic）的干燥花冠，具有通淋、消腫、解毒等功效，多用來治療淋病、癰疽腫毒、燙傷等。有研究指出黃蜀葵花的主要成分為黃酮類化合物，其中以金絲桃苷、槲皮素，異槲皮素含量zui高。本文利用天津蘭博*代理的美國蘭博液相色譜儀建立了測定黃蜀葵花中金絲桃苷的含量的HPLC法，結(jié)果表明方法簡單準(zhǔn)確，結(jié)果可靠。

1.1 儀器

分析型液相色譜儀（HPLC），由AS3000自動(dòng)進(jìn)樣器，Laballiance Series 高壓泵、DAD檢測器和Lablliance色譜工作站組成，配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱。

1.2試劑和樣品

金絲桃苷對照品品（中國藥品生物制品檢定所），乙腈（色譜純），水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑為分析純，黃蜀葵花樣品購自當(dāng)?shù)厮幍?，產(chǎn)地為安徽。

1.3對照品溶液配制

精密稱取金絲桃苷對照品5.00 mg，加甲醇定容至25 mL，制成0.200 g/L的金絲桃苷對照品儲(chǔ)備液，冷藏備用。

1.4供試品溶液的制備

精密稱取樣品粉末200 mg，70%甲醇溶解，超聲30 min，過濾液置于50mL容量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，冷藏備用。

1.5色譜條件：

色譜柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流動(dòng)相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（v/v=20:80）

柱溫：40℃；

流速：1.0 mL/min；

檢測波長：360 nm；

進(jìn)樣量：20 uL。

2測試結(jié)果

2.1檢測波長的選擇

取金絲桃苷對照品溶液和樣品溶液，分別進(jìn)行紫外光譜掃描，金絲桃苷在258nm和360nm有兩個(gè)zui大吸收峰，兼顧樣品和對照品，所以我們選用測定波長為360nm。

圖1 金絲桃苷對照品的液相色譜圖

2.2線性關(guān)系、方法檢出限考察

分別移取金絲桃苷對照品儲(chǔ)備液0.5、1、2、3、4 mL，分別用甲醇定容至10 mL，配制得到一系列對照品溶液。取上述溶液各20 uL，按1.5所述色譜條件進(jìn)樣分析。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X（ug）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程。金絲桃苷的線性回歸方程為Y = 209253 X +9531.5，r = 0.9998，線性范圍為2～16 ug；以3倍信噪比計(jì)算該方法的zui低檢測限為30 ng.

2.3精密度和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，每次20 uL，測定峰面積。金絲桃苷峰面積測定結(jié)果的RSD為1.34%，表明方法精密度良好 。

取樣品，按1.4條件制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣20 uL，測定峰面積，計(jì)算金絲桃苷的含量，含量測定結(jié)果的 RSD為1.03%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取樣品溶液分別在0、2、4、8、12按1.5的色譜條件進(jìn)樣，（不測時(shí)于冰箱4℃冷藏），測定峰面積，峰面積的RSD分別為1.86%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知金絲桃苷含量的黃蜀葵花樣品，分別加入不同含量的金絲桃苷對照品，按1.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果如表1。

表1 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

3結(jié)論

黃蜀葵花的主要化學(xué)成分是黃酮類，其中金絲桃苷，含量較高，活性較強(qiáng)，且性質(zhì)穩(wěn)定，所以選擇測定金絲桃苷的含量做為質(zhì)量控制的指標(biāo)。本文采用液相色譜法測定黃蜀葵花中金絲桃苷的含量，經(jīng)過精密度、回收率等試驗(yàn)考查，均符合要求。該方法靈敏，快速，準(zhǔn)確，可用于對黃蜀葵花的質(zhì)量進(jìn)行評價(jià)。