TPO-Ab ELISA

TPO-Ab ELISA樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。檢測對象:人血清/血漿及相關液體實驗方法:雙抗原夾心法進行測

ELISA試劑分類: RD試劑盒，GBD試劑盒，IBL試劑盒

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
 3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
 4、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

常用生化試劑作用：

1、蛋白酶K：能水解消化蛋白質，特別是與DNA結合的組蛋白，在尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml，推薦反應緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。

2、SDS：十二烷基硫酸鈉，溶解細胞膜上的脂類與蛋白質，因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜，并解離細胞中的核蛋白，SDS 還能與蛋白質結合而沉淀。

3、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內(nèi)的蛋白表達等。IPTG和乳糖的結構相似，所以它和乳糖一樣，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結合，

使阻遏蛋白的空間構像變化，四聚體解聚成單體，失去與操縱子特異性結合的能力，從而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以轉錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是，

IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍白斑篩選。作用*的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定。

4、X-gal：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷，是IPTG的顯色試劑，在IPTG的催化下顯藍色。常跟IPTG一起用與藍白斑篩選。

5、G418：一種抗生素，對幾乎所有的細胞都有毒性，是穩(wěn)定轉染zui常用的選擇試劑。當neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方

6、DMSO：二甲基亞砜。實驗室常用于作液體層析溶劑，同時用作測試物質紫外消光值上時用作參照物。能溶于所有烷烴和烯烴。

7、曲拉通X-100：TritonX-100，用的細胞裂解液成分之一，在保護蛋白活性方面有一定作用， 能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40。

8、NP-40：很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

9、BSA：牛血清白蛋白， 主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。在動物細胞無血清培養(yǎng)中，添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液。

10、甲酰胺： 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑，也用于穩(wěn)定毛細管電泳中的變性單股DNA。

注意事項：

1、去正規(guī)耗材經(jīng)銷處。

2、注意耗材的防偽標志?，F(xiàn)在各大廠商的耗材都增加了不同的防偽標志。如果貼有防偽標準，注意是正好貼在封口處，如果拆封了的話標志也會碎了。

一、常見elisa試劑盒

1、細胞因子檢測試劑盒：

如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉化生長因子，趨化因子，細胞因子受體，粘附分子，生長因子，凋亡因子等等

2、肝纖維化檢測elisa試劑盒：

如纖維連接蛋白，透明質酸，膠原，基質金屬蛋白酶抑制因子，基質金屬蛋白酶，層粘蛋白等等

3、心肌梗塞檢測elisa試劑盒：

如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應蛋白等等

4、內(nèi)分泌檢測elisa試劑盒：

如免疫球蛋白,抗鏈O-aso,類風濕因子RF,C反應蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,鐵蛋白,轉鐵蛋白transferrin等等