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　　一、客戶(hù)收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；

　　收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。

　　二、如為貼壁細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度：

　　1. 未超過(guò)80%匯合度時(shí)，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；然后打開(kāi)蓋子，先把培養(yǎng)基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過(guò)火（嚴(yán)禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時(shí)間根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況調(diào)整）之后，傳代或者凍存。

　　2. 超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

　　1) 棄去培養(yǎng)液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；

　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來(lái)；

　　3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中，按要求分瓶。

　　三、如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

　　注意：換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。

　　四、細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

　?。?）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

　?。?）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；

　?。?）存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；

　?。?）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

　　（5）視具體情況而定。　

　　細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)3個(gè)原則：1、用自己的一套試劑，不要和別人混用；2、勤觀察細(xì)胞，像養(yǎng)寵物一樣喜愛(ài)和關(guān)心；3、有規(guī)律地?fù)Q液和傳代，不要“三天打魚(yú)，兩天曬網(wǎng)”。凍存細(xì)胞時(shí)間為5-7個(gè)工作日，活細(xì)胞為7-15個(gè)工作日。

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