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上海達(dá)為科生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2022-12-22 20:32:22瀏覽次數(shù):1226次

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過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝實(shí)驗(yàn):慢病毒(Lentivirus)載體是以 HIV-1 (人類免疫缺陷1型病毒)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細(xì)胞、長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)外源基因等優(yōu)點(diǎn),因此成為導(dǎo)入外源基因的有力工具。現(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用到各種細(xì)胞系的基因過表達(dá)、RNA干擾、microRNA研究以及活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。

1 、過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝實(shí)驗(yàn)特點(diǎn):

1.1 直接包裝成為假病毒顆粒,對(duì)分裂和非分裂細(xì)胞均有感染作用,適合RNAi研究和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 (比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞或其它原代細(xì)胞)。

1.2 可以通過簡(jiǎn)單方式,在短時(shí)間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達(dá)特定基因的多種細(xì)胞株。

1.3 可用于基因敲除、基因**和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究。

1.4 無需轉(zhuǎn)染試劑,操作簡(jiǎn)便。

1.5 可以根據(jù)客戶需要制備多種標(biāo)記。

2、過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝實(shí)驗(yàn)原理:

慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。構(gòu)建的siRNA / miRNA慢病毒載體,與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比,一方面可以擴(kuò)增替代瞬時(shí)表達(dá)載體使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞,并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組,進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)。

3 、過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝流程:

3.1 含有目的基因的慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。

注:客戶也可以提供構(gòu)建好的重組慢病毒表達(dá)載體。

3.2 慢病毒表達(dá)載體與包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞。

3.3 收集病毒液。

3.4 純化和濃縮病毒。

3.5 分裝、- 80 oC保存。

3.6 滴度測(cè)定及無菌檢測(cè)。

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