操作步驟
(1)所有細(xì)胞培養(yǎng)試劑和Transwell chamber 放在37°C溫育;
(2)待測細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期，消化細(xì)胞，用PBS和無血清培養(yǎng)基先后洗滌一次，用無血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，計數(shù)，調(diào)整濃度為2X10* /ml;
(3)在下室(即24孔板底部)加入600-800μ 1含10%血清的培養(yǎng)基，上室加入100- 150μ 1細(xì)胞懸液，繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24小時;
(4)用鑷子小心取出chamber,吸干上室液體，移到預(yù)先加入約800μ 1甲醇的孔中，室溫固定30分鐘;
(5)取出chamber， 吸千上室固定液，移到預(yù)先加入約800μ 1 Giemsa 染液的.孔中，室溫染色15-30分鐘;
(6)輕輕用清水沖洗浸泡數(shù)次，取出chamber, 吸去上室液體，用濕棉棒小心擦去_上室底部膜表面上的細(xì)胞;
(7)用小鑷子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至載玻片上用中性樹膠封片;
(8)顯微鏡下取9個隨機視野計數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果。