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HE染色實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2024-09-12 15:37:21瀏覽次數(shù):889次

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HE染色實(shí)驗(yàn)伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料,在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物,細(xì)胞漿的染色與染液的pH在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7—5.0)以下時(shí),胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離,則細(xì)胞漿帶正電荷,就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合,使細(xì)胞漿著色,呈現(xiàn)紅色。

       HE染色實(shí)驗(yàn)是病理學(xué)和組織學(xué)中常用的一種染色技術(shù)。這種技術(shù)利用蘇木精和伊紅兩種染料對(duì)細(xì)胞的不同組成部分進(jìn)行染色,從而在顯微鏡下能夠清晰地觀察到

組織的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞的形態(tài)。下面將詳細(xì)介紹實(shí)驗(yàn)的各個(gè)方面:


1. 染色原理

   化學(xué)原理:蘇木精是一種堿性染料,能夠與細(xì)胞核中的酸性物質(zhì)如DNA結(jié)合,使其染成藍(lán)紫色。而伊紅是一種酸性染料,與細(xì)胞質(zhì)中的堿性蛋白質(zhì)結(jié)合,使其染成

                    紅色。

   物理原理:除了化學(xué)反應(yīng),HE染色還涉及物理吸附和吸收作用。這些物理現(xiàn)象使得不同結(jié)構(gòu)的細(xì)胞成分能更明顯地區(qū)分。

2. 實(shí)驗(yàn)步驟

   樣品準(zhǔn)備:對(duì)于石蠟切片,需要先進(jìn)行脫蠟處理。通常使用二甲苯進(jìn)行兩次脫蠟,每次約5-15分鐘。

   水化處理:經(jīng)過(guò)脫蠟后,樣本需通過(guò)下行乙醇系列(如100%, 95%, 80%, 70%)進(jìn)行水化,每一步約5分鐘。

   蘇木精染色:水化后,用蘇木精染液染色3-5分鐘,具體時(shí)間根據(jù)所需著色強(qiáng)度調(diào)整。染色后用自來(lái)水沖洗去除多余染料。

   分化處理:使用1%鹽酸酒精進(jìn)行分化處理數(shù)秒至數(shù)十秒,以去除背景色及非特異性著色,再水洗并返藍(lán)幾分鐘,這有助于增強(qiáng)染色的對(duì)比度。

   伊紅染色:將分化后的切片用伊紅染液染色1-3分鐘,使胞漿等結(jié)構(gòu)著色,再次水洗去除多余的伊紅染料。

   脫水封片:通過(guò)上行乙醇系列(70%, 80%, 95%, 100%)進(jìn)行脫水,每個(gè)濃度1-3分鐘。最后使用二甲苯透明化兩次,每次約3-5分鐘,然后用中性樹(shù)膠封片。

3. 結(jié)果觀察

   細(xì)胞核:被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色。

   細(xì)胞漿:被伊紅染成粉紅色至桃紅色。

   其他結(jié)構(gòu):如軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,膠原纖維呈淡粉紅色。

4. 應(yīng)用領(lǐng)域

   病理診斷:用于識(shí)別和判斷各種疾病組織中的異常變化,如腫瘤、炎癥等。

   生物醫(yī)學(xué)研究:用于研究正常和病變組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)差異,探索疾病的發(fā)病機(jī)制。

   教學(xué):作為組織學(xué)和病理學(xué)教學(xué)中的標(biāo)準(zhǔn)染色方法,幫助學(xué)生更好地理解細(xì)胞和組織的微細(xì)結(jié)構(gòu)。

5. 注意事項(xiàng)

   脫蠟wanquqan:確保二甲苯新鮮且脫蠟時(shí)間足夠,否則會(huì)導(dǎo)致染色不均勻。

   控制染色程度:及時(shí)鏡檢以調(diào)整蘇木精和伊紅的染色時(shí)間,防止過(guò)度或不足染色。

   充分脫水:避免脫水不wanquan導(dǎo)致的封片后出現(xiàn)白色霧狀影響觀察。


       綜上所述,HE染色實(shí)驗(yàn)是一種基礎(chǔ)且關(guān)鍵的技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中。通過(guò)了解其原理、步驟和注意事項(xiàng),科研人員和醫(yī)務(wù)工作者可以更

準(zhǔn)確地掌握和應(yīng)用這一技術(shù),推動(dòng)相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展和進(jìn)步。


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