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鈣離子濃度檢測

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所  在  地上海市

更新時間:2024-10-11 10:29:27瀏覽次數(shù):724次

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鈣離子濃度檢測通常利用鈣離子敏感的熒光探針,這些探針能夠與細胞內(nèi)的鈣離子結(jié)合,導(dǎo)致其熒光特性發(fā)生改變。通過流式細胞術(shù),可以測量這些熒光變化,從而定量分析細胞內(nèi)的鈣離子濃度。

原理和方法

鈣離子濃度檢測通常利用鈣離子敏感的熒光探針,這些探針能夠與細胞內(nèi)的鈣離子結(jié)合,導(dǎo)致其熒光特性發(fā)生改變。通過流式細胞術(shù),可以測量這些熒光變化,從而定量分析細胞內(nèi)的鈣離子濃度。常用的鈣離子熒光探針包括Fluo-3 AM、Fura-2 AM和Indo-1 AM等,它們在進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶水解,釋放出熒光探針,后者與鈣離子結(jié)合后發(fā)出熒光,其強度與鈣離子濃度成正比。


實驗操作步驟

  1.探針裝載:將細胞與鈣離子熒光探針(如Fluo-3 AM)共孵育,使探針進入細胞內(nèi)。

  2.孵育條件:孵育通常在37°C的條件下進行,有時需要避光以保護探針不受光照影響。

  3.洗滌:孵育后,使用無鈣的緩沖液洗滌細胞,以去除未進入細胞內(nèi)的探針。

  4.流式細胞儀分析:使用流式細胞儀檢測細胞的熒光信號,通常使用488nm的激發(fā)光和適當?shù)臑V光片來收集熒光信號。

  5.數(shù)據(jù)分析:通過分析熒光強度,可以計算細胞內(nèi)的鈣離子濃度。


實驗中的關(guān)鍵點和注意事項

  1.確保使用的實驗器具和試劑不含有鈣離子,以避免影響實驗結(jié)果。

  1.控制細胞濃度,以避免阻塞流式細胞儀的流動系統(tǒng)。

  1.在實驗過程中應(yīng)避免直接光照射探針,以防熒光淬滅。

  1.使用適當?shù)年幮院完栃詫φ諄硇试O(shè)備和驗證實驗條件。


時效性信息

最新的信息顯示,流式細胞術(shù)在鈣離子濃度檢測方面仍然是一個重要的工具,它能夠提供關(guān)于細胞內(nèi)鈣動態(tài)變化的實時信息。例如,有研究使用流式細胞儀動態(tài)監(jiān)測大鼠胰腺腺泡細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,以及Jurkat細胞在不同刺激下的鈣離子濃度動態(tài)變化。這些研究強調(diào)了流式細胞術(shù)在生物學和醫(yī)學研究中的應(yīng)用價值。在進行實驗時,應(yīng)特別關(guān)注這些最新的實驗方法和技術(shù)進展。


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