BCA法蛋白抽提定量實驗步驟

BCA（Bicinchoninic acid）法是一種常用的蛋白質定量方法，它基于蛋白質在堿性條件下能夠將銅離子（Cu^2+）還原為亞銅離子（Cu^+），隨后BCA與Cu^+形成穩(wěn)定的紫色復合物，該復合物在562nm處具有強烈的吸光度，其吸光度與蛋白質濃度呈正比。

以下是使用BCA法蛋白抽提定量實驗的基本步驟：

1.配制標準品和工作液：

  配制不同濃度的牛血清白蛋白（BSA）標準品溶液，通常線性范圍為20-2000 μg/mL。

  配制BCA工作液，將BCA試劑A和BCA試劑B按50:1的比例混合。

2.樣品處理：

  如果需要，對蛋白質樣品進行適當?shù)某樘岷拖♂尅?/p>

3.加入BCA工作液：

  向含有標準品和待測樣品的微孔板或試管中加入BCA工作液，樣品與工作液的體積比通常為1:20。

4.孵育：

  將微孔板或試管在37°C下孵育30分鐘，以促進顏色的發(fā)展。

5.冷卻和讀取吸光度：

  孵育結束后，讓樣品冷卻至室溫。

  使用酶標儀在562nm波長處測定樣品的吸光度。

6.制作標準曲線：

  根據(jù)BSA標準品的吸光度繪制標準曲線，并計算樣品中蛋白質的濃度。

注意事項：

  確保所有試劑在使用前充分混合且在推薦的溫度下存儲。

  嚴格按照試劑添加順序和操作步驟進行，避免任何步驟的顛倒或省略。

  實驗中應包括空白對照，以消除試劑本身的吸光度貢獻。

以上步驟綜合了多個搜索結果中的信息。在進行實驗時，應遵循最新的實驗指南和制造商的具體指示，以確保實驗結果的準確性。