鴨白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒操作方法

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)地：國產(chǎn)/進(jìn)口

規(guī)格：48T/96T

保存：2-8℃

檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

產(chǎn)品特點(diǎn)：運(yùn)用免疫學(xué)技術(shù)測定標(biāo)本的方法，該方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、高重復(fù)好！

實(shí)驗(yàn)方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）凡購買目錄本公司ELISA檢測試劑盒可提供代測服務(wù)。

樣本類型：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝50ul×檢測種類。取材前可向銷售人員索要人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白elisa試劑盒說明書。

人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白elisa試劑盒樣本采集：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲(chǔ)存在2-4℃?zhèn)溆?；如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70度可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

標(biāo)本要求：

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

鴨白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒操作方法

ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（0.1-200ng/ml范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。

7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。

9、底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。

“ELISA試劑盒"實(shí)驗(yàn)操作流程（具體請(qǐng)參照說明書）：

① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值我公司擁有完善的售前、售中、售后服務(wù)，以及實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)，歡迎您上海酶遠(yuǎn)ELISA試劑盒，第二季度八五折優(yōu)惠，可為您節(jié)省時(shí)間提供免費(fèi)代測服務(wù)。

“ELISA試劑盒"特點(diǎn)：① 準(zhǔn)確度高，靈敏度高，特異性強(qiáng)；② 檢測時(shí)間短；③ 操作簡便；④ 安全可靠，。

鴨白介素4(IL-4)ELISA檢測試劑盒操作方法

ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題分析：

一.ELISA 標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)

的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。

1. 標(biāo)本的采取和保存

大部分ELISA 檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。抗凝不*的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。

2.加樣

加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。

3.保溫

在建立ELISA 方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)

1-2 小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會(huì)造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng)，邊上的值會(huì)偏高，建議為了客觀的判斷結(jié)果，將質(zhì)控放在非邊緣位置。

4.洗滌

洗滌在ELISA 過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?？梢哉f在ELISA 操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。

洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。

洗板時(shí)注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋，應(yīng)按要求稀釋，所用的水電導(dǎo)率在1.5us/cm 之下，洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。保證洗板浸泡時(shí)間為40 秒左右，孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡。

5. 顯色和比色

TMB 經(jīng)HRP 作用后，約40 分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸減弱，至2 小時(shí)后即可*消退至無色。TMB 的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時(shí)間（12-24 小時(shí)）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時(shí)可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指于測讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計(jì)。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室溫宜在15~30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30 分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測讀A 值時(shí)，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD 用492nm 波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次，*次在zui適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不 移動(dòng)ELISA 板的位置，zui終測得的A 值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

選上海酶遠(yuǎn)“ELISA試劑盒"，擁有質(zhì)保價(jià)廉服務(wù)三重優(yōu)勢！

優(yōu)勢一：用途

1、將酶催化反應(yīng)的放大作用和抗原抗體親和反應(yīng)的高度專一性、特異性相結(jié)合，以酶標(biāo)記的抗原或抗體作為主要試劑進(jìn)行免疫測試，所以具有很高的靈敏度。

2、實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對(duì)其進(jìn)行定量。

3、其抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。

4、為濃縮液，配有稀釋液，稀釋后直接可用，無需另行配置

優(yōu)勢二：質(zhì)量保證，服務(wù)完善

1、上海酶遠(yuǎn)代理RD/TSZ品牌酶聯(lián)免疫試劑盒，假一賠十，如有質(zhì)量問題無條件包退換！

2、“人ELISA試劑盒"的售前售后服務(wù)都是非常完善的，而且我們提供免費(fèi)代測服務(wù)，一周之內(nèi)就能夠出結(jié)果。

優(yōu)勢三：價(jià)廉

1、我公司產(chǎn)品價(jià)格合理公道，上海酶遠(yuǎn)至今成立五年之久，為感謝朋友們支持，給到您7.8折優(yōu)惠的！

2、每逢佳節(jié)美日我們都會(huì)展開不同的*活動(dòng)以此表示感謝您的長期支持與信任。（主要形式有：買就送、滿就送、打折、降價(jià)等）

☉ 避免直接接觸終止液和底物。上海酶遠(yuǎn)提醒：如不小心接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

☉ 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

☉ 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。