兔腎素(Renin)ELISA檢測試劑盒現(xiàn)貨價格
參數(shù)規(guī)格:
檢測種屬:大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨ELISA試劑盒等種屬
產(chǎn)品保存:2~8℃、有效期6個月
產(chǎn)品詢價:您可以通過、郵件、傳真或在線客戶方式詢價。
Elisa試劑盒應(yīng)用:準(zhǔn)確定性定量分析(但Elisa試劑盒只能供科研使用,不能作為臨床診斷使用)
ELISA酶免試劑盒四大特性:
1.特異性強(qiáng):不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
2.重復(fù)性好:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
3.穩(wěn)定性高:實(shí)驗(yàn)效果很穩(wěn)定。
4.超靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,稀釋度和樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
主要優(yōu)點(diǎn):
一、、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型;
五、zui大限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
兔腎素(Renin)ELISA檢測試劑盒現(xiàn)貨價格
操作流程:
1. 實(shí)驗(yàn)前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備;
2. 加樣(標(biāo)準(zhǔn)品及樣本)100μL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100μL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100μL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90μL,37°C孵育15-25分鐘;
8. 加終止液50μL,立即450nm讀數(shù)。
工作原理:
將轉(zhuǎn)化生長因子β2 (TGFb2)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的轉(zhuǎn)化生長因子β2 (TGFb2)與連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入生物素化的轉(zhuǎn)化生長因子β2 (TGFb2)抗體,將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后,加入HRP標(biāo)記的親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長因子β2 (TGFb2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。
兔腎素(Renin)ELISA檢測試劑盒現(xiàn)貨價格
ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題分析:
一.ELISA 標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)
的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。
1. 標(biāo)本的采取和保存
大部分ELISA 檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來,在5 天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG 聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑??鼓?的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性,建議盡量不用抗凝血尤其是肝素抗凝劑。
2.加樣
加樣時應(yīng)將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
3.保溫
在建立ELISA 方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,實(shí)驗(yàn)表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)
1-2 小時,產(chǎn)物的生成可達(dá)。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng),邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結(jié)果,將質(zhì)控放在非邊緣位置。
4.洗滌
洗滌在ELISA 過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來??梢哉f在ELISA 操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。
洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。
洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應(yīng)按要求稀釋,所用的水電導(dǎo)率在1.5us/cm 之下,洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其融解后配制。保證洗板浸泡時間為40 秒左右,孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡。
5. 顯色和比色
TMB 經(jīng)HRP 作用后,約40 分鐘顯色達(dá),隨即逐漸減弱,至2 小時后即可*消退至無色。TMB 的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間(12-24 小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀,通常指于測讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001,準(zhǔn)確性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下,操作時室溫宜在15~30℃,使用前先預(yù)熱儀器15-30 分鐘,測讀結(jié)果更穩(wěn)定。
測讀A 值時,要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD 用492nm 波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀,即每孔先后測讀兩次,*次在zui適波長(W1),第二次在不敏感波長(W2),兩次測定間不 移動ELISA 板的位置,zui終測得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
訂購說明:
1. 明確檢測何種蛋白;
2. 明確編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性;
3. 尋找檢測這些物種蛋白的試劑盒;
4. 咨詢上海酶遠(yuǎn)使用的抗體類型;
5. 做出自己的判斷該買哪個試劑盒。
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