詳述紫外分光光度計(jì)測(cè)DNA濃度的方法
紫外分光光度計(jì)如何來(lái)測(cè)DNA濃度呢?以下將由上海旦鼎技術(shù)人員為您詳細(xì)講解,歡迎瀏覽以下詳細(xì)內(nèi)容!
將待測(cè)DNA溶液作適當(dāng)稀釋,選用光程為0.5cm的石英比色杯,在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定OD260和OD280的值,按以下公式計(jì)算DNA濃度。
DNA濃度(ng /µL)=OD260×50×稀釋倍數(shù)
當(dāng)OD260/OD280< 1.8,表示蛋白質(zhì)含量較高
當(dāng)OD260/OD280> 2.0,表示RNA含量較高
當(dāng)OD260/OD280=1.8~2.0,表示DNA較純
TE緩沖液:10mM Tris-HCl(pH 8.0);1mM EDTA(pH 8.0)
CTAB提取緩沖液:100mM Tris-HCl(pH=8.0),20mM EDTA,1.4M NaCl,2%CTAB,2%ß-巰基乙醇
1×TBE緩沖液:Tris 10.8g、硼酸5.5g、EDTA(0.5M,pH8.0) 4mL,加H2O至1000mL
10×上槽緩沖液:Tris108g、硼酸55g、EDTA(1M,pH8.0)20mL,加H2O至1000mL,稀釋10倍使用
5×下槽緩沖液:Tris 54g、無(wú)水NaAc 205g、硼酸27.5g、EDTA(0.5M,pH8.0)20mL,加H2O定溶至1000mL,稀釋5倍使用Loading buffer:甲酰胺49mL、EDTA(0.5M,pH8.0)1mL、溴酚藍(lán)0.125g、二甲苯氰0.125g,混合備用
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