北京方程生物提供雞促卵泡素(FSH)免費代測,專業(yè)的人做專業(yè)的事,讓科學的機器更率的運行。
ELISA實驗的基本操作流程1. 包被ELISA板子或使用商品化ELISA板。 2. 加待檢樣品:使之與固相抗體/抗原反應一段時問,讓標本中的抗原/抗體與固相載體上的抗體/抗原結合,形成固相復合物。 3. 加酶標抗體:使固相復合物與酶標抗體結合。 4. 加底物:夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應的程度進行抗原/抗體的定性或定量。
用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。 2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。 3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。 4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。 5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以"+"、"-"號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
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