普通生物顯微鏡的基本成像原理

   光線→（反光鏡）→遮光器→通光孔→鏡檢樣品（透明）→物鏡的透鏡（*次放大成倒立實(shí)像）→鏡筒→目鏡（再次放大成虛像）→眼。

一、光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)

1．生物顯微鏡光學(xué)部分 

包括目鏡、物鏡、聚光器和光源等。

（1）目鏡

通常由兩組透鏡組成，上端的一組又稱為“接目鏡”，下端的則稱為“場(chǎng)鏡”。兩者之間或在場(chǎng)鏡的下方裝有視場(chǎng)光闌（金屬環(huán)狀裝置），經(jīng)物鏡放大后的中間像就落在視場(chǎng)光闌平面上，所以其上可加置目鏡測(cè)微尺。在目鏡上方刻有放大倍數(shù)，如10×、20×等。按照視場(chǎng)的大小，目鏡可分為普通目鏡和廣角目鏡。有些顯微鏡的目鏡上還附有視度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)，操作者可以對(duì)左右眼分別進(jìn)行視度調(diào)整。另有照相目鏡(NFK)可用于拍攝。

（2）物鏡

由數(shù)組透鏡組成，安裝于轉(zhuǎn)換器上，又稱接物鏡。通常每臺(tái)顯微鏡配備一套不同倍數(shù)的物鏡，包括：
①低倍物鏡：指 1×～6×；
②中倍物鏡：指 6×～25×；
③高倍物鏡：指 25×～63×；
④油浸物鏡：指 90×～100×。

其中油浸物鏡使用時(shí)需在物鏡的下表面和蓋玻片的上表面之間填充折射率為1.5 左右的液體（如香柏油等），它能顯著地提高顯微觀察的分辨率。其他物鏡則直接使用。觀察過(guò)程中物鏡的選擇一般遵循由低到高的順序，因?yàn)榈捅剁R的視野大，便于查找待檢的具體部位。顯微鏡的放大倍數(shù)，可粗略視為目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)的乘積。

（3）聚光器

由聚光透鏡和虹彩光圈組成，位于在載物臺(tái)下方。聚光透鏡的功能是將光線聚焦于視場(chǎng)范圍內(nèi)；透鏡組下方的虹彩光圈可開大縮小，以控制聚光器的通光范圍，調(diào)節(jié)光的強(qiáng)度，影響成像的分辨力和反差。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)觀察目的，配合光源強(qiáng)度加以調(diào)節(jié)，得到*成像效果。

（4）光源

較早的普通光學(xué)顯微鏡借助鏡座上的反光鏡，將自然光或燈光反射到聚光器透鏡的*作為鏡檢光源。反光鏡是由一平面和另一凹面的鏡子組成。不用聚光器或光線較強(qiáng)時(shí)用凹面鏡，凹面鏡能起會(huì)聚光線的作用；用聚光器或光較弱時(shí)，一般都用平面鏡。新近出產(chǎn)的顯微鏡一般直接在鏡座上安裝光源，并有電流調(diào)節(jié)螺旋，用于調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度。光源類型有鹵素?zé)?、鎢絲燈、汞燈、熒光燈、金屬鹵化物燈等。

顯微鏡的光源照明方法分為兩種：透射型與反射(落射)型。前者是指光源由下而上通過(guò)透明的鏡檢對(duì)象；反射型顯微鏡則是以物鏡上方打光到(落射照明)不透明的物體上。

2. 生物顯微鏡機(jī)械部分
包括鏡座、鏡柱、鏡壁、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)和準(zhǔn)焦螺旋等。

（1）鏡座
基座部分，用于支持整臺(tái)顯微鏡的平穩(wěn)。

（2）鏡柱
鏡座與鏡臂之間的直立短柱，起連接和支持的作用。

（3）鏡臂
顯微鏡后方的弓形部分，是移動(dòng)顯微鏡時(shí)握持的部位。有的顯微鏡在鏡臂與鏡柱之間有一活動(dòng)的傾斜關(guān)節(jié)，可調(diào)節(jié)鏡筒向后傾斜的角度，便于觀察。

（4）鏡筒
安裝在鏡臂先端的圓筒狀結(jié)構(gòu)，上連目鏡，下連接物鏡轉(zhuǎn)換器。顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)筒長(zhǎng)為160 mm，此數(shù)字標(biāo)在物鏡的外殼上。

（5）物鏡轉(zhuǎn)換器
鏡筒下端的可自由旋轉(zhuǎn)的圓盤，用于安裝物鏡。觀察時(shí)通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器來(lái)調(diào)換不同倍數(shù)的物鏡。

（6）載物臺(tái)
鏡筒下方的平臺(tái)，*有一圓形的通光孔。用于放置載玻片。載物臺(tái)上裝有固定標(biāo)本的彈簧夾，一側(cè)有推進(jìn)器，可移動(dòng)標(biāo)本的位置。有些推動(dòng)器上還附有刻度，可直接計(jì)算標(biāo)本移動(dòng)的距離以及確定標(biāo)本的位置。

（7）準(zhǔn)焦螺旋
裝在鏡臂或鏡柱上的大小兩種螺旋，轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)可使鏡筒或載物臺(tái)上下移動(dòng)，從而調(diào)節(jié)成像系統(tǒng)的焦距。大的稱為粗準(zhǔn)焦螺旋，每轉(zhuǎn)動(dòng)一圈，鏡筒升降10mm；小的為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，轉(zhuǎn)動(dòng)一圈可使鏡筒僅升降0.1mm。一般在低倍鏡下觀察物體時(shí)，以粗準(zhǔn)焦螺旋迅速調(diào)節(jié)物像，使之位于視野中。在此基礎(chǔ)上，或在使用高倍鏡時(shí)，用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微調(diào)。必須注意，一般顯微鏡裝有左右兩套準(zhǔn)焦螺旋，作用相同，但切勿兩手同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)兩側(cè)的螺旋，防止因雙手力量不均產(chǎn)生扭力，導(dǎo)致螺旋滑絲。

二、生物顯微鏡操作方法

1．鏡檢前的準(zhǔn)備

室內(nèi)應(yīng)清潔而干燥，實(shí)驗(yàn)臺(tái)臺(tái)面水平，穩(wěn)固無(wú)震動(dòng)，顯微鏡附近不應(yīng)放置腐蝕性的試劑。從顯微鏡柜或鏡箱內(nèi)取出顯微鏡時(shí)，要用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，平穩(wěn)地取出，放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)桌面上，置于操作者左前方，距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣約10cm，鏡臂朝自己，鏡筒朝前。實(shí)驗(yàn)臺(tái)右側(cè)放繪圖用具。

2．調(diào)節(jié)光源

如需利用外置光源，宜采用散射的自然光或柔和的燈光。直射的太陽(yáng)光會(huì)對(duì)觀察者的眼睛造成傷害。轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡正對(duì)通光孔，將聚光器上的虹彩光圈開到zui大，觀察目鏡中視野亮度，同時(shí)調(diào)節(jié)反光鏡角度，使光照達(dá)到zui明亮zui均勻。自帶光源的顯微鏡，可通過(guò)調(diào)節(jié)電流旋鈕來(lái)調(diào)節(jié)光照的強(qiáng)弱。

3．裝置待檢玻片

將待觀察的樣品制作成臨時(shí)或*裝片，放在載物臺(tái)上，用彈簧夾固定，有蓋玻片的一面朝上。移動(dòng)推進(jìn)器，調(diào)節(jié)待檢樣品至通光孔的中心。

4．低倍鏡觀察

將低倍鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔，緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，將物鏡與裝片的距離調(diào)至zui近。注意不要壓碎蓋玻片。通過(guò)目鏡觀察，同時(shí)用粗準(zhǔn)焦螺旋緩慢調(diào)節(jié)，直至物像出現(xiàn)，再用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微調(diào)，同時(shí)調(diào)節(jié)光源亮度與虹彩光圈的大小，使物像達(dá)到zui清晰的程度。并利用推進(jìn)器把需要進(jìn)一步放大觀察的部分移至視野*。如果使用雙筒目鏡，應(yīng)在觀察前先調(diào)整雙筒距離，使兩眼視場(chǎng)合并。

5．高倍鏡觀察

轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，選擇較高倍數(shù)的物鏡，用 細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)焦距，到 物像清晰為止。

6．油鏡觀察

油浸物鏡的工作距離（指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離）很短，一般在0.2 mm 以內(nèi)，且一般光學(xué)顯微鏡的油浸物鏡沒有“彈簧裝置”，因此使用油浸物鏡時(shí)，調(diào)焦速度必須放慢，避免壓碎玻片，并使物鏡受損。

（1）在低倍鏡下找到觀察目標(biāo)，中、高倍鏡下逐步放大，將待觀察部位置于視野*，調(diào)節(jié)光源和虹彩光圈，使通過(guò)聚光器的光亮達(dá)到zui大。

（2）轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，將鏡筒上旋（或?qū)⑤d物臺(tái)下降）約2 cm，加一小滴香柏油于玻片的鏡檢部位上。

（3）將粗準(zhǔn)焦螺旋緩緩轉(zhuǎn)回，同 時(shí)注意從側(cè)面觀察，直 至油鏡浸入油滴，鏡 頭幾乎與標(biāo)本接觸。

（4）從目鏡中觀察，用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微調(diào)，直至物象清晰。

（5）鏡檢結(jié)束后，將鏡頭旋離玻片，立即清潔鏡頭。一般先用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油滴。再用擦鏡紙蘸少許yimi酒精混合液（2：3），擦去殘留油跡，zui后再用干凈的擦鏡紙擦凈（注意向一個(gè)方向擦拭）。

7．還原顯微鏡

關(guān)閉內(nèi)置光源并拔下電源插頭，或使反光鏡與聚光器垂直。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡頭呈八字形位置與通光孔相對(duì)。再將鏡筒與載物臺(tái)距離調(diào)至zui近，降下聚光器。罩上防塵罩，將顯微鏡放回柜內(nèi)或鏡箱中。

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