你是否還在為選用指標(biāo)蛋白而彷徨？你是否還在糾結(jié)蛋白抗體哪家強？你是否還在為尋找陽性對照而迷茫？讓我們走進(jìn)文獻(xiàn)，為你分析問題尋求方向！

1）外泌體Western blot鑒定時通常會檢測哪些指標(biāo)蛋白？

    根據(jù)22篇外泌體相關(guān)文獻(xiàn)的統(tǒng)計，排在前4位的檢測指標(biāo)為CD63（13/22）、Tsg101(8/22)、 CD9和CD81并列第三位（6/22）；接著檢測較多的4個指標(biāo)為Alix（4/22）、 HSP70(3/22)、 flotillin (3/22)和Syntenin (2/22)；此外還有一些指標(biāo)僅在1篇文獻(xiàn)中出現(xiàn)過，例如HSP90、LAMP2B、LMP1、ADAM10、nicastrin、AChE、AQP2、RPL5、a-1AT。

    針對外泌體的定性檢測至少選擇兩個指標(biāo)就能滿足文章發(fā)表需要了，比如檢測CD63和Tsg101。

2, 外泌體Western blot鑒定時通常使用哪些公司的抗體？

    CD63 抗體的供應(yīng)商：文獻(xiàn)報道zui多的兩個公司Abcam (ab68418和ab8219) 和Santa Cruz (sc-5275)，其他公司有Systems Biosciences Inc、Abnova (clone MEM-259)、BD Pharmingen (551458)。

    Tsg101抗體的供應(yīng)商：文獻(xiàn)報道zui多的兩個公司Abcam（ab125011）和Santa Cruz （sc-7964），其他公司有Thermo Pierce和Sigma-Aldrich。

    CD9抗體的供應(yīng)商：文獻(xiàn)報道zui多的是Abcam (ab92726)，其他的公司有Santa Cruz和Systems Biosciences Inc。

    CD81抗體的供應(yīng)商： 文獻(xiàn)報道zui多的是Santa Cruz (sc-9158和H-121)，其他的公司有Novus Biologicals (Cat# NB100–65805)、ImmunoWay。

    Alix抗體的供應(yīng)商：文獻(xiàn)報道的公司有Cell Signaling (#2171)、Santa Cruz、Abcam。

    HSP70抗體的供應(yīng)商：文獻(xiàn)報道的公司有Abcam (ab19136)、Santa Cruz (sc-24)。

    flotillin抗體的供應(yīng)商: 文獻(xiàn)報道的公司有BD Bioscience。

Syntenin抗體的供應(yīng)商：文獻(xiàn)報道的公司有ThermoFisher Scientific (Cat# PA5-28826) 和Abcam (ab133267)。

    其他抗體信息請查閱附錄整理的文獻(xiàn)資料。

3， 外泌體Western blot定性檢測中有沒有陽性對照？

    從發(fā)表的文章來看，并沒有一篇文章結(jié)果中提到了陽性對照樣品，但是已經(jīng)被文獻(xiàn)報道的樣品可以作為后人Western blot檢測實驗的陽性對照，通過這樣陽性樣品的檢測來判斷實驗體系是否正常。羅列一下文獻(xiàn)中的陽性對照樣品：脂肪組織巨噬細(xì)胞外泌體、神經(jīng)干細(xì)胞外泌體、大鼠皮層神經(jīng)元外泌體、SCC-9和Cal-27細(xì)胞外泌體、MDA-MB-231外泌體、星型膠質(zhì)細(xì)胞外泌體、中性白細(xì)胞外泌體等。

4， 外泌體Western blot定性檢測中有沒有內(nèi)參？

     大部分文獻(xiàn)中沒有檢測內(nèi)參基因（19/22），個別文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作為內(nèi)參進(jìn)行檢測（見下圖），從檢測的結(jié)果來看，外泌體中的Actin、GAPDH和Tubulin的表達(dá)豐度相對于正常細(xì)胞樣品中的較低，Western blot檢測時可能會檢測不到任何條帶或者條帶微弱。