采卵之前,先往收集管中注入5mLPBS+肝素液(5mg/mL),置恒溫槽中,溫度37℃,將長針與導管用PBS+肝素液沖洗2遍后準備采卵。母牛站立保定,操作人員對牛進行直腸檢查,并掏凈直腸內的糞便;清洗外陰,并用0.1%新潔爾滅消毒外陰,然后將采卵針的探頭插入到陰道深部,到達陰道穹窿后,根據(jù)所要穿刺的卵巢左側還是右側而把探頭放在穹窿的相應一側。操作人員一手持探頭,另一手在直腸內隔著直腸壁將卵巢牽引至貼在探頭端部。
在進口牛用B超機監(jiān)視器上能清楚看到卵巢,然后上下左右翻轉卵巢,根據(jù)圖像區(qū)分及確定卵泡數(shù)和黃體,并把卵泡進行分級,卵泡直徑2~5mm為小卵泡,5~10mm為中卵泡,大于10mm的卵泡為大卵泡,然后調整卵巢和探頭位置,使監(jiān)視器上卵泡位于穿刺引線上之后,推進穿刺針,對卵泡進行穿刺。同時用腳踏開關控制真空泵抽取卵泡液,真空泵壓力在35~60mm汞柱之間調整;從監(jiān)視器上可觀察到被抽取卵泡液的卵泡開始縮小,變得不規(guī)則,直到卵泡液被*抽取,卵泡在監(jiān)視器上消失,退出穿刺針,再對第二個卵泡進行穿刺,抽取卵泡液,直到該卵巢上2mm以上的卵泡均被穿刺后,換另一側卵巢,同法處理。
然后用PBS+肝素液沖洗采卵針及導管,沖洗液也放入收集管,將采得的卵泡液用胚胎收集濾杯過濾,卵母細胞在濾杯中,用PBS液反復沖洗幾遍,將濾杯中的卵母細胞倒入表面皿中,在體視鏡下進行觀察、檢卵。將檢出的符合要求的卵母細胞放進成熟液中,在5%CO2和39℃溫度的培養(yǎng)箱中進行成熟培養(yǎng)。
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