紅細胞去除試劑盒的使用方法！

一、背景及概述

紅細胞去除試劑盒使用浮力，能夠清除掉樣本中99%以上的紅細胞，同時并不殘留血紅蛋白等物質，使得目的細胞使用不受紅細胞的干擾，能夠更好的進行下游應用和分析。

二、使用方法

CN201110097319.7 提供了一種用于體外分離純化骨髓、臍帶血或外周血中有核細胞并且能去除紅細胞的試劑盒以及該試劑盒的使用方法。本發(fā)明所述的試劑盒包括各自隔離包裝的沉淀液、純化液、懸浮液和紅細胞裂解液，其中沉淀液是溶于生理鹽水的羥乙基淀粉，其重量體積濃度為6％；純化液是聚蔗糖泛影鈉；懸浮液是生理鹽水；紅細胞裂解液包括各自隔離包裝的兩種原液，其中原液1號由以下配方組 成：10g/L葡萄糖、0.6g/L磷酸二氫鉀、3.58g磷酸氫二鈉·7H2O和0.1g/L酚紅溶液，原液 2號由以下配方組成：1.86g/L氯化鈣·2H2O、80g/L氯化鈉、1.04g/L氯化鎂和2.0g/L硫酸鎂·7H2O。所謂隔離包裝是指沉淀液、純化液和懸浮液各自密封在互不相通的容器中，優(yōu)選地，各自獨立包裝。

使用方法包括如下步驟：

(1)將經過抗凝處理的骨髓/臍帶血/外周血倒入沉淀液試劑瓶中，擰緊瓶蓋顛倒混勻 5次，擰松瓶蓋，靜置22?25分鐘。

(2)用10ml的移液管將上清液轉到兩個50ml的離心管中，不要吸到紅細胞沉淀，并配平。

(3)將兩個離心管4℃，離心力710xg(轉速2000rpm)，5分鐘離心，離心完畢后，棄去上清，用手指輕輕震開沉淀，每管加25ml生理鹽水重懸細胞。

(4)將純化液按每管25ml加到另外兩個50ml新的離心管中，將第3步中的細胞懸液用移液管緩慢加到純化液的液面上，保證兩種液體之間的液面清晰，然后，4℃，離心力710xg(轉速2000rpm)，20分鐘離心，關閉離心機剎車功能。

(5)離心后，吸取中間層細胞，加到新的離心管中，用50ml注射用生理鹽水稀釋，配平，4℃，離心力400xg(轉速1500rpm)；8分鐘離心洗滌細胞兩次；

(6)棄上清，向細胞沉淀中加入應用液1#，輕輕吹打15～20s混勻，再加入應用液2#，輕輕吹打15～20s混勻，后加入應用液3#，輕輕吹打15～20s混勻，逐步裂解殘留紅細胞。

(7)4℃，離心力400xg(轉速1500rpm)，8分鐘離心洗滌細胞三次；

(8)將洗后的細胞加到懸浮液中，備用。

本發(fā)明所述的試劑盒，使用的樣品類型為骨髓/臍帶血/外周血，可以按照通用的方法收 集所需的骨髓/臍帶血/外周血樣本；確保骨髓/臍帶血/外周血收集后轉入一次性抗凝血袋； 骨髓/臍帶血/外周血收集后應在6小時內進行分離純化有核細胞。本發(fā)明所述的試劑盒，回收率可以達到》90％，分離的有核細胞活率≥96％，維持了干細胞在體外微環(huán)境的恒定，且能同時裂解有核細胞中的紅細胞。

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