“在細(xì)胞培養(yǎng)的路上,有多虐心就有多少需要值得注意的地方。小小的瓶皿之中,細(xì)胞點(diǎn)點(diǎn),引無數(shù)英雄競掛東南枝。正所謂“萬事開頭難”,即便是細(xì)胞復(fù)蘇與保存這兩件看似簡單的事情,也能造成實(shí)驗(yàn)汪內(nèi)心無比巨大的陰影面積。”在2016年10月一篇名為:實(shí)驗(yàn)新人必讀:細(xì)胞培養(yǎng)那些事兒。詳細(xì)闡述了細(xì)胞凍存相關(guān)問題。引起了細(xì)胞生物學(xué)的重視。
在細(xì)胞凍存中存在三大問題。一、凍存液的配方;二、凍存的分步降溫;三、凍存液穩(wěn)定性。
一般的凍存液配方基本具有三要素:培養(yǎng)基、血清、DMSO。培養(yǎng)基的選擇要根據(jù)細(xì)胞種類。血清大多采用動(dòng)物源血清,但血清中未知成分和感染物質(zhì)會(huì)給凍存帶來影響與風(fēng)險(xiǎn)。DMSO在細(xì)胞凍存中要保持在5%~15%范圍內(nèi),過少會(huì)影響復(fù)蘇,過多對細(xì)胞有毒性。綜上所述,這么多因素制約著細(xì)胞凍存,稍不注意讓您的細(xì)胞研究就會(huì)變得很“虐心”。
細(xì)胞凍存時(shí)要嚴(yán)格進(jìn)行梯度降溫(-4℃→-20℃~-40℃→-80℃→液氮)。要知道冰火兩重天的生活環(huán)境只會(huì)讓嬌弱的細(xì)胞自爆身亡,謹(jǐn)記:緩降溫!但如果真心趕時(shí)間時(shí),可以使用細(xì)胞凍存盒進(jìn)行細(xì)胞凍存,而后盡快將其轉(zhuǎn)入液氮中。
凍存液穩(wěn)定性,無血清的穩(wěn)定性比含血清穩(wěn)定性高。與含血清類型相比,批次間的成分組成差異小,可保持穩(wěn)定的品質(zhì)。不含血清,因此沒有因動(dòng)物源的未知成分和感染物質(zhì)所產(chǎn)生的影響與風(fēng)險(xiǎn)??蓪o血清馴化細(xì)胞進(jìn)行冷凍,節(jié)省再馴化步驟。
富士膠片和光推出一款無血清細(xì)胞凍存液——BAMBANKER®,這款產(chǎn)品是細(xì)胞凍存研究的革新,那么它“新”在哪里呢?具有幾大特點(diǎn),無血清、無需分步降溫,直接使用、無需程序降溫盒,即用型細(xì)胞凍存液。完*了上述所有的不良因素。
那么有些讀者要問了,這么優(yōu)質(zhì)的凍存液真正在應(yīng)用方面怎么樣呢?下面一張圖片可以直觀地看到其凍存液的“多樣性”。
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