活細胞熒光成像往往需要更長時間的觀察和拍攝，對熒光信號的持久穩(wěn)定要求更高。這就需要研究者要選用更明亮更穩(wěn)定的熒光染料，如Invitrogen™ Molecular Probes™ 熒光標記試劑，同時盡可能優(yōu)化實驗條件。除此之外，提高活細胞成像的信噪比還可通過使用能減少細胞外背景熒光或增加標記熒光染料光穩(wěn)定性的試劑進行信號優(yōu)化。

降低背景熒光

    活細胞成像實驗中非常重要的一點是需要在專門的培養(yǎng)基中進行成像。常規(guī)培養(yǎng)基含有酚紅可淬滅可見光波段的熒光染料，或含有自發(fā)熒光成分如核黃素等，都降低了信噪比。推薦使用活細胞成像培養(yǎng)基如Gibco™ FluroBrite™ DMEM或基于HEPES的Live Cell Imaging Solution，既能保持細胞健康同時又能大可能的降低或消除背景熒光。

No.01FluoroBrite™ DMEM培養(yǎng)基

      是一種基于DMEM配方的培養(yǎng)基，其背景熒光與PBS相當，與普通無酚紅DMEM培養(yǎng)基相比，其背景熒光降低了90%，同時賦予細胞健康生長所需的營養(yǎng)。

No.02Live Cell Imaging Solution

      一款由Molecular Probes專為活細胞成像應用開發(fā)的光學透明的溶液，適用于成像觀察、染料標記和細胞洗滌多個步驟，可幫助細胞保持健康長達 4 小時。

No.03BackDrop™ 背景抑制劑

      添加專門的與活細胞兼容的背景抑制劑也有助于減少細胞背景熒光。Invitrogen™ BackDrop™ 背景抑制劑（貨號B10512）適用于在藍色、綠色或紅色熒光通道中觀察到高背景信號或弱目標熒光信號時，可大大提升信噪比，且無需洗滌。

 增加熒光基團穩(wěn)定性

       當熒光基團被頻繁曝光或長時間照射時，往往會發(fā)生降解，降低熒光信號強度，同時產生自由基單線態(tài)氧進一步降解臨近染料分子，從而可能造成熒光信號損失。加入的活細胞抗淬滅試劑ProLong™ Live（貨號P36974）可顯著增強熒光基團的光穩(wěn)定性。

 ProLong Live可有效增強多種熒光基團穩(wěn)定性，成像時間延長50% 以上。

nvitrogen™ ProLong™ Live抗淬滅試劑含有來自天然大腸桿菌質膜的酶，只在細胞外工作而不進入胞內，幾乎不影響細胞活力、細胞增殖及各種細胞功能，且使用便捷：

? 適用多種熒光基團：熒光蛋白, Hoechst, MitoTracker等

? 直接滴加即可，穩(wěn)定信號長達48h以上

? 對各種細胞功能無影響

? 可兼容任何培養(yǎng)基、緩沖液等

      除此之外，活細胞成像實驗中也要綜合優(yōu)化多種實驗條件以獲得蕞嘉信噪比，如選用合適穩(wěn)定的熒光基團（Ex/Em與熒光顯微鏡匹配），兼顧實驗總時間、拍照頻率及熒光通道數等，上機觀察時儀器參數設置、調整光照時間和光照強度等等都要考慮。

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