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一、生長量測定法
1、體積測量法：又稱測菌絲濃度法
通過測定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況.方法是,取一定量的待測培養(yǎng)液(如 10毫升)放在有刻度的離心管中,設定一定的離心時間(如5分鐘)和轉(zhuǎn)速(如5000 rpm),離心后,倒出上清夜,測出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10.菌絲濃度測定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長的一個重要監(jiān)測指標.這種方法比較粗放,簡便,快速,但需要設定一致的處理條件,否則偏差很大,由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營養(yǎng)物,結(jié)果會有一定偏差。
2、稱干重法
可用離心或過濾法測定.一般干重為濕重的10-20%.在離心法中,將一定體積待測培養(yǎng)液倒入離心管中,設定一定的離心時間和轉(zhuǎn)速,進行離心,并用清水離心洗滌1-5次,進行干燥.干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干,或采用紅外線烘干,也可在80℃或40℃下真空干燥,干燥后稱重.如用過濾法,絲狀真菌可用濾紙過濾,細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾,過濾后用少量水洗滌,在40℃下進行真空干燥.稱干重發(fā)法較為煩瑣,通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時,常采用這種方法,如活性干酵母(activity dry yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。
3、比濁法
微生物的生長引起培養(yǎng)物混濁度的增高.通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值,判斷微生物的生長狀況.對某一培養(yǎng)物內(nèi)的菌體生長作定時跟蹤時,可采用一種特制的有側(cè)臂的三角燒瓶.將側(cè)臂插入光電比色計的比色座孔中,即可隨時測定其生長情況,而不必取菌液.該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長監(jiān)測.如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計,在波長600nm 處用比色管定時測定發(fā)酵液的吸光光度值OD600,以此監(jiān)控E.Coli的生長及誘導時間.
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