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complementtech R137說明書

來源:上海起發(fā)實驗試劑有限公司   2021年03月12日 17:48  

complementtech R137說明書

 名稱:因子H蛋白(大鼠)
目錄號:R137
可用規(guī)格:100µg/瓶
濃度:1.0 mg/mL(準確濃度見檢驗報告)
形態(tài):液體
純度:> 90%(SDS-PAGE法)
緩沖液:10 mM磷酸鈉,145 mM NaCl,pH 7.3
消光系數(shù)A280 nm = 1.682(1.0 mg/mL)
分子量:155000 Da(單鏈)
豁免前:無,0.22µm過濾
儲存:-70 ℃
C或以下。避免凍融。
來源:來自健康動物的正常大鼠血清
預防措施:使用常規(guī)預防措施處理動物血液制品。
來源:美國生產。

Rat Factor H

 

產品描述

 

從正常大鼠血清中純化大鼠(Rattus Norvegicus)補體因子H(fH)。H因子是補體替代途徑的重要調控成分。這對于防止宿主細胞和組織(尤其是腎臟)的補體激活至關重要。它具有兩個功能活性:1)控制替代途徑C3 / C5轉化酶的形成和衰減(衰減加速活性); 2)作為I因子的輔因子,當C3b與H因子結合時,它通過蛋白水解作用使C3b失活(輔助因子活性)。據(jù)報道,C3b結合蛋白類似于從大鼠血漿中分離出的H因子,它是由大鼠血小板產生的,并起著免疫粘附受體的作用,可清除嚙齒動物中的免疫復合物(Alexander JJ等人(2001年))。

 

一般描述

大鼠(褐家鼠)補體因子H(fH)從正常大鼠血清中純化而來。因子H是補體替代途徑的重要調節(jié)成分。它對于預防宿主細胞和組織(尤其是腎臟)上的補體激活至關重要。它具有兩種功能活性:1)控制旁路途徑C3/C5轉化酶的形成和衰變(衰變加速活性),和2)作為因子I的輔因子,當C3b與因子H結合時,其蛋白水解使C3b失活(輔因子活性)。據(jù)報道,C3b結合蛋白與從大鼠血漿中分離的因子H相似,由大鼠血小板產生,并作為免疫粘附受體在嚙齒類動物中清除免疫復合物(Alexander J.J. et al.(2001))..(2001)).

因子H是由20個同源結構域組成的155000 Da蛋白,在半柔性串上像微珠一樣排列。N端5個結構域與C3b結合并抑制因子b的結合,從而減少C3/C5轉化酶的形成。因子H還與預形成的C3/C5轉化酶(C3b、Bb和C3b、Bb、C3b)結合,并引起催化亞基Bb的快速釋放(衰變加速)。這些活性對于控制血漿中替代途徑擴增過程的自發(fā)激活至關重要。此外,當C3b附著在顆粒表面時,因子H控制這些酶的形成和衰變。對宿主細胞有效,對外來顆粒效果較差,原因如下。補體的替代途徑是通過產生液相C3b樣C3(H2O)和C3b的“蜱”不斷激活。因子H可與這些蛋白結合并作為輔因子,使因子I(一種以活性形式循環(huán)的絲氨酸蛋白酶)可裂解其產生無活性蛋白(iC3b或iC3(H2O))的α鏈。如果C3b不以這種方式失活,它繼續(xù)形成C3轉化酶,消耗因子b和C3。如果C3b附著在表面,則通過因子H和i以相似的方式轉化為iC3b。當C3b駐留在宿主細胞上時,由于因子H識別的宿主標記物的存在,因子H更有效。由于因子H識別的宿主特異性識別,補體介導的宿主損傷小化。

 

 因子H似乎通過識別宿主標志物來調節(jié)潛在病原體與宿主細胞和組織之間的區(qū)分。連接到表面的C3b可以啟動替代途徑的擴增級聯(lián)。因子H在宿主細胞上阻止了這一點,并使其發(fā)生在不帶有宿主樣標記的表面。這些宿主特異性結構被認為是聚陰離子簇,如唾液酸和硫酸化糖胺聚糖。通過位于因子H結構域6-20的多個多陰離子結合位點識別宿主標志物。一個位點位于結構域7,該結構域的突變(Y402H)與年齡相關性黃斑變性中的補體激活和組織破壞密切相關(Zipfel,P.F. et al.(2006)).一個暫定位點位于結構域12-14區(qū)域,一個非常重要的位點位于結構域19-20的C-末端。該C-末端位點似乎是幫助結合宿主表面的主要位點。在遺傳性溶血性尿毒癥綜合征中,影響或位于這些結構域的突變導致補體替代途徑的激活(Zipfel,P.F. et al.(2006)).該位點似乎是參與聚陰離子依賴性二聚體和因子H四聚體形成的位點(Pangburn,M.K. et al.
(2009)).

 

 物理特性和結構據(jù)報道,大鼠因子H的分子量約為150,000至155,000道爾頓(Daha MR et al.(1982);Demberg Tet al.(2002);Alexander JJ et al.,2001)。大鼠因子H的糖基化水平為9.5%(Demberg Tet al.,(2002)。在非還原和還原條件下通過SDS/聚丙烯酰胺凝膠電泳(Invitrogen)對純化的大鼠因子H(目錄號R137)進行分析,結果顯示有一條條帶略微早于人因子H(155,000道爾頓)遷移。使用ProtParam,根據(jù)其氨基酸序列計算大鼠因子H的消光系數(shù)(E1%/280 nm = 16.82),并假設所有Cys殘基對均形成胱氨酸(即一對半胱氨酸分子通過二硫鍵連接)。根據(jù)其氨基酸序列計算的pI為6.29。Demberg Tet al.(2002)報告因子H大鼠血清的正常血漿濃度為238 + 21 μg/mL,而Daha MR et al(1982)報告為244 + 21 μg/mL。

 

 功能參見上述一般描述。
分析H因子的功能試驗測量其衰變加速活性或I因子輔因子活性(Morgan,B.P.(2000))。已報告了連續(xù)監(jiān)測的熒光測定法(Pangburn,M.K. et al.(1983)),該方法利用存在C3b時ANS(8-苯胺基-1-萘磺酸)的熒光下降約8倍(當C3b轉化為iC3b時)。因子H的其他功能試驗見人因子H的含量測定章節(jié)(目錄號A137)。
使用方便的輔因子測定法(通過SDS凝膠測定純化C3b的裂解)測定純化大鼠因子H(目錄號R137)的輔因子活性。
在存在1µg人因子I(目錄號A138)的情況下,將4 μg(4 μg)大鼠C3b(目錄號R114)與不同量的大鼠因子H(目錄號R137,范圍為0.1至1µg,總體積為12µL)共同孵育。將試驗置于濕冰上,然后在37 ℃下孵育15 min,此時向試管中加入含還原劑的SDS樣品緩沖液,并將樣品加熱5 min。SDS凝膠分析顯示,在 > 0.02 μg大鼠因子H和1 μg人因子I存在的情況下,大鼠C3b的α鏈裂解 > 90%。

 

 功能在上述一般描述章節(jié)中描述了因子H的生物學功能。
遺傳學大鼠因子H染色體位置13。大鼠因子H的NCBI基因ID編號為155012,UniProt登錄號為Q91YB6。
預防措施/毒性/危害:該蛋白從動物血漿/血清中提純,因此必須采用適用于處理任何動物血源性產品的預防措施。
危害代碼:B WGK Germany 3MSDS可根據(jù)要求提供。
CAS登記號:80295-65-4

 

 

 

 

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