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液相色譜柱流動相的配制和流速的選擇

來源:廣州太瑋生物科技有限公司   2021年07月05日 15:02  
液相色譜柱流動相的配制和流速的選擇
 
1、流動相的配制
 
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
 
(1) 流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
(2) 流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)
(3) 流動相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
(4) 流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
(5) 流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進行。
(6) 在流動相配制好后,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
 
2、流動相流速的選擇
 
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
 
當(dāng)選用最佳流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
 
注意:
 
(1) 含水流動相最好在實驗前配制,尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。最好加入*,防止細菌生長。
(2) 流動相要求使用0.45 μm或0.22μm濾膜過濾,除去微粒雜質(zhì)。
(3) 使用HPLC級溶劑配制流動相,使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能。

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