沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)的使用方法與應(yīng)用！

一、背景

沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)用于黑曲霉及白念珠菌的分離培養(yǎng)，還用于一次性使用衛(wèi)生用品真菌菌落總數(shù)檢測(GB15979-2002)。原理：蛋白胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;氯霉素可抑制細(xì)菌的生長。

配方(每升)：蛋白胨10g；葡萄糖40g；瓊脂15g；氯霉素0.1g；最終pH 6.0±0.2

二、使用方法

1、稱取本品65.1g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝三角瓶，115℃高壓滅菌15min，備用。

2、取樣液接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1mL，然后加入15 mL左右已溶化并保溫至45℃左右的培養(yǎng)基，搖勻，凝固后，置25±2℃培養(yǎng)7d。

3、分別于3、5、7天觀察結(jié)果，計(jì)算平板上的菌落數(shù)，并求平均值。

白念珠菌是一種腐物寄生菌，平時(shí)生存于人體的皮膚、粘膜、消化道及其他臟器中，當(dāng)機(jī)體抵抗力降低時(shí)，白色念珠菌就會繁殖，達(dá)到一定量時(shí)，人體就會發(fā)病，所以白念珠菌是一種條件致病菌。

三、應(yīng)用

用于念珠菌ERG3基因突變對抗真菌藥物耐藥的作用研究：

侵襲性真菌感染發(fā)病率不斷上升，以念珠菌感染為主，其中白念珠菌為主。但由于預(yù)防性使用抗真菌藥物，非白念珠菌尤其是對氟康唑天然耐藥的克柔念珠菌感染出現(xiàn)上升趨勢，但白念珠菌感染仍占優(yōu)勢。

隨著白念珠菌和克柔念珠菌對唑類抗真菌藥物的耐藥現(xiàn)象越來越嚴(yán)重，深入研究其耐藥機(jī)制迫在眉睫。

了解白念珠菌和克柔念珠菌對常用抗真菌藥物的敏感性，對白念珠菌耐藥菌株和敏感菌株ERG3基因擴(kuò)增、測序、生物信息學(xué)分析，明確白念珠菌ERG3基因突變與抗真菌藥物耐藥之間的關(guān)系。

方法：收集患者無菌體液標(biāo)本，使用沙氏培養(yǎng)基、玉米吐溫80瓊脂培養(yǎng)基、CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基和API 20C AUX鑒定系統(tǒng)進(jìn)行念珠菌的分離和鑒定。從中分別選取35株白念珠菌和20株克柔念珠菌進(jìn)行體外藥物敏感性試驗(yàn)，確立耐藥菌株和敏感菌株。對白念珠菌ERG3基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測序，最后應(yīng)用BLAST軟件進(jìn)行比對分析。

結(jié)果：檢出的163株真菌中，白念珠菌54.61%，非白念珠菌42.94%，霉菌2.45%。其中非白念珠菌從高到低依次為克柔念珠菌(16.57%)、光滑念珠菌(14.72%)、熱帶念珠菌(4.91%)、近平滑念珠菌(4.29%)和葡萄牙念珠菌(2.45%)；

Logistic多因素回歸分析結(jié)果顯示：性別、病程、體溫、預(yù)防性使用抗真菌藥物、免疫抑制劑、有創(chuàng)傷的檢查和治療、患者預(yù)后和地域因素是住院患者無菌體液標(biāo)本中侵襲性真菌感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

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