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【FACSCelesta實(shí)驗(yàn)應(yīng)用系列】之全血NKT檢測(cè)

來(lái)源:北京眾仁鑫商貿(mào)有限公司   2021年11月05日 11:11  

【FACSCelesta實(shí)驗(yàn)應(yīng)用系列】之全血NKT檢測(cè)

【實(shí)驗(yàn)概述】

NKT細(xì)胞是一類新型的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,在外周血中比例極低,但NKT細(xì)胞能增強(qiáng)免疫反應(yīng),在抗腫瘤、抗感染、抑制自身免疫病及移植耐受中可發(fā)揮重要作用,因此人全血NKT的檢測(cè)在疾病診斷中具有重要作用,流式細(xì)胞儀是檢測(cè)NKT最佳方法之一,且NKT在全血中比例較低,全血不破紅直接檢測(cè)NKT同時(shí)也是判斷流式細(xì)胞儀檢測(cè)極低含量細(xì)胞能力的實(shí)驗(yàn)方法之一。

 

【實(shí)驗(yàn)方法】

    ①/ 儀器配置

 

  Flow cytometer  Laser
  FACSCelesta  488nm Blue Laser
  640nm Red Laser

 

    ②/ 配色方案及流式試劑

 

    ● 配色方案

CD3CD56CD45CD235a
FITCPEPerCP-Cy5.5APC

 

    ● 流式試劑

 

  Products NameCatalog No.CloneSizeVol.per.Test
  BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Human
   CD3
555332UCHT1100 Test5ul
  BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Human
   CD56
555516B159100 Test5ul
  BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse
   Anti-Human CD45
564105HI30100 Test5ul
  BD Pharmingen™ APC Mouse Anti-Human
   CD235a
551336GA-R2 (HIR2)0.1 mg20ul/100ul Whole Blood
  BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (10x )555899
100ml

 

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】

 

人全血中紅細(xì)胞比例最高,可用對(duì)應(yīng)抗體CD235a將其區(qū)分,而NKT比例低,在此樣本中,NKT群與其他細(xì)胞群區(qū)分明顯,可清楚區(qū)分開(kāi),其比例約為萬(wàn)分之一,需收集bai萬(wàn)級(jí)別的細(xì)胞數(shù),但因紅細(xì)胞數(shù)目眾多,以低速(14ul/min)的上樣速度上樣,檢測(cè)速度即可達(dá)到18000 events/s左右,所以此試驗(yàn)同時(shí)也驗(yàn)證了流式細(xì)胞儀在高速高濃度樣本的檢測(cè)中的液流穩(wěn)定性及信號(hào)丟失率。

* 本資料僅限科研用途使用


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