【FACSCelesta實(shí)驗(yàn)應(yīng)用系列】之全血NKT檢測(cè)
【FACSCelesta實(shí)驗(yàn)應(yīng)用系列】之全血NKT檢測(cè)
【實(shí)驗(yàn)概述】
NKT細(xì)胞是一類新型的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,在外周血中比例極低,但NKT細(xì)胞能增強(qiáng)免疫反應(yīng),在抗腫瘤、抗感染、抑制自身免疫病及移植耐受中可發(fā)揮重要作用,因此人全血NKT的檢測(cè)在疾病診斷中具有重要作用,流式細(xì)胞儀是檢測(cè)NKT最佳方法之一,且NKT在全血中比例較低,全血不破紅直接檢測(cè)NKT同時(shí)也是判斷流式細(xì)胞儀檢測(cè)極低含量細(xì)胞能力的實(shí)驗(yàn)方法之一。
【實(shí)驗(yàn)方法】
①/ 儀器配置
Flow cytometer | Laser |
FACSCelesta | 488nm Blue Laser 640nm Red Laser |
②/ 配色方案及流式試劑
● 配色方案
CD3 | CD56 | CD45 | CD235a |
FITC | PE | PerCP-Cy5.5 | APC |
● 流式試劑
Products Name | Catalog No. | Clone | Size | Vol.per.Test |
BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Human CD3 | 555332 | UCHT1 | 100 Test | 5ul |
BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Human CD56 | 555516 | B159 | 100 Test | 5ul |
BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human CD45 | 564105 | HI30 | 100 Test | 5ul |
BD Pharmingen™ APC Mouse Anti-Human CD235a | 551336 | GA-R2 (HIR2) | 0.1 mg | 20ul/100ul Whole Blood |
BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (10x ) | 555899 | 100ml |
【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
人全血中紅細(xì)胞比例最高,可用對(duì)應(yīng)抗體CD235a將其區(qū)分,而NKT比例低,在此樣本中,NKT群與其他細(xì)胞群區(qū)分明顯,可清楚區(qū)分開(kāi),其比例約為萬(wàn)分之一,需收集bai萬(wàn)級(jí)別的細(xì)胞數(shù),但因紅細(xì)胞數(shù)目眾多,以低速(14ul/min)的上樣速度上樣,檢測(cè)速度即可達(dá)到18000 events/s左右,所以此試驗(yàn)同時(shí)也驗(yàn)證了流式細(xì)胞儀在高速高濃度樣本的檢測(cè)中的液流穩(wěn)定性及信號(hào)丟失率。
* 本資料僅限科研用途使用
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