抑菌圈是福萊明發(fā)現(xiàn)青霉素的過程中,提出的一個(gè)詞匯。青霉的培養(yǎng)皿的周圍是一個(gè)以青霉菌落為圓心的一個(gè)規(guī)則的圓,不生長細(xì)菌,而在遠(yuǎn)離青霉的地方有細(xì)菌生長。不生長細(xì)菌的地方,這個(gè)圓圈被福萊明稱為抑菌圈。
抑菌圈實(shí)驗(yàn)說明
抑菌圈法是衡量殺菌防霉劑效果的一種方式,主要用于測定殺菌防霉劑對細(xì)菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用,是定性或半定量的方法。通過殺菌防霉劑在瓊脂平板上的擴(kuò)散能力來初步篩選更有效的殺菌防霉劑品種。
用具和材料
霉菌培養(yǎng)皿,無菌吸管(或針筒),圓片濾紙(直徑50px),帶玻璃珠的無菌水,帶過濾漏斗的三角牌,鑷子,接種針(環(huán)),熔化狀態(tài)的瓊脂培養(yǎng)基(最好保溫于45℃左右水浴中),一定濃度的藥劑,供試驗(yàn)用的菌種。
試驗(yàn)過程
1. 用接種環(huán)挑取各試管斜面的菌種于帶玻璃珠的無菌水中,用手振蕩數(shù)分鐘使孢子分散,過濾后制成混合孢子懸液。
2. 用無菌吸管(或針筒)向各培養(yǎng)皿中注入一定濃度的混合孢子懸浮液0.5mL。
3. 向各培養(yǎng)皿內(nèi)注入15Ml~20ml的熔化狀瓊脂培養(yǎng)基(約45℃),將菌液與培養(yǎng)基混合均勻,待其冷卻。
4. 用鑷子將圓片濾紙?jiān)诓煌瑵舛鹊姆烂箘┲薪n片刻,取出置于帶菌培養(yǎng)基平板的中央,蓋上蓋子
5. 置適宜溫度下,培養(yǎng)2~3d,觀察濾紙片圓片周圍抑菌圈的有無及大小。
注意事項(xiàng)
1. 所有的操作用具和材料都要事先做滅菌處理,操作必須在無菌室(或無菌箱)內(nèi)于火焰旁進(jìn)行。
2. 霉菌、細(xì)菌、酵母菌等各種微生物都必須分別配置混合菌液,即這里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等諸種菌的分別混合液,并非霉菌、細(xì)菌和酵母菌的混合液。
3、 混合菌液的濃度一般為106~108cfu/mL.
4. 倒入培養(yǎng)皿的瓊脂培養(yǎng)基溫度不能太高(一般為45℃左右),否則會(huì)引起微生物死亡。也不能太低,因?yàn)榄傊瑫?huì)很快凝結(jié),以致攪拌不均勻,影響試驗(yàn)結(jié)果。
5. 各種微生物的最適生長溫度不同(例如霉菌一般為25~30℃,細(xì)菌一般為32~37℃等),恒溫培養(yǎng)時(shí)宜分開放置。
結(jié)果評(píng)判
由于濾紙圓片所吸附的藥液慢慢向四周擴(kuò)散,因此在濾紙片的周圍就出現(xiàn)清晰的抑菌圈(加入該防霉劑對供試菌有抑制效果)。抑菌圈的大小代表藥劑抗菌力的高低。在一定的藥劑濃度范圍內(nèi),藥劑的濃度越高則抑菌圈的直徑越大。此法同樣適合于測定單個(gè)菌的抗菌效果。
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