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在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)倉(cāng)鼠腎細(xì)胞的具體步驟
在培養(yǎng)各種細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是使用頻率比較高的一種細(xì)胞培養(yǎng)耗材，它多用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)，規(guī)格從25ml-225ml不等。倉(cāng)鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)液會(huì)選用這種耗材，其培養(yǎng)的具體步驟如下：
T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶
1、細(xì)胞培養(yǎng)前期準(zhǔn)備工作：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
T225細(xì)胞培養(yǎng)瓶
2、細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
三角細(xì)胞搖瓶
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
以上是在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)倉(cāng)鼠腎細(xì)胞的具體步驟。此外，細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml。
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