PCR技術(shù)已應用到生物制藥領(lǐng)域的各個環(huán)節(jié)從前期研發(fā)階段后選序列的篩選，到工藝開發(fā)環(huán)節(jié)穩(wěn)健方法的建立，至生產(chǎn)放行的把控。每一個環(huán)節(jié)都需要倚仗PCR技術(shù)的結(jié)果作為衡量的依據(jù)。諸如支原體，宿主DNA，內(nèi)外源性病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒等風險因子都要求在生產(chǎn)起始、中間過程和終產(chǎn)品階段，進行定性或定量PCR分析，以確保風險因子可控。對CART，TCRT，CAR-NK等細胞治療產(chǎn)品而言，CAR/TCR基因拷貝數(shù)，RCR/RCL復制型慢病毒檢測,轉(zhuǎn)染效率等也都是必需的PCR檢測項目。

PCR體系構(gòu)建中經(jīng)常遇到的問題

• 一個樣品多項目檢測，體系構(gòu)建相當復雜（多引物、探針、酶、dNTP、模板和Mg2+，緩沖液）在過程中易出現(xiàn)加樣錯誤；

• 操作繁瑣但定量結(jié)果判定又很嚴：標曲R2大于0.98，擴增效率介于90-110，低標準點Ct不高于39。一旦結(jié)果不達標，又消耗人力重新開展實驗；

• RCL檢測出現(xiàn)假陽性，無模板的陰性對照（No Template Control，簡稱 NTC）NTC也由于污染造成假陽性；

• 每日樣品及樣品量不一樣，需要跟進樣品量調(diào)整孔板加樣的位置；

• 由于沒有數(shù)據(jù)追蹤，結(jié)果失敗卻很難排查錯誤原因；

• 不同實驗員不同時間重復性差。

如圖所示，CART免疫產(chǎn)品質(zhì)控中，定量PCR構(gòu)建體系。（放大）

所以大家都在尋找一個極易上手、高效快速構(gòu)建各類高精度反應體系，且能標準化的試驗結(jié)果。珀金埃爾默（PerkinElmer）公司推出的新一代JANUS G3 自動化PCR體系構(gòu)建工作站就是一個不錯的解決方案?？蓾M足的應用包括DNA/RNA的提取、純化；DNA/RNA 濃度均一化；PCR 和測序產(chǎn)物純化；PCR 反應板的建立(PCR, RT-PCR, Real Time PCR)等相關(guān)實驗。

JANUS G3自動化PCR體系構(gòu)建工作站 （放大）

JANUS G3自動化PCR體系構(gòu)建工作站以其穩(wěn)固的性能，靈活的配置，簡便人性化軟件操作，正在逐步瓦解諸多手工操作遇到的難題。

JANUS G3 PCR體系工作站特質(zhì)

一、消除實驗誤差，提高實驗精度，重復性好

在PCR和qPCR加樣過程中，尤其在配置96孔或者384孔反應板時，采用高通量高精度的自動化PCR構(gòu)建體系，可以避免在高壓工作下人工疲勞操作帶來的不均一性，減小實驗誤差，并提高樣本處理效率。

1. JANUS G3自動化PCR體系構(gòu)建工作站具有AccuSense液面感應技術(shù)，每通道獨立移液器均可以的進行液面探測，吸頭總是接觸液面下1-3mm，確保能吸到樣品，同時盡量避免液體吸附到吸頭外側(cè)臂；確保的移液精度，減少樣品吸附殘留。兼容的電離液和非電離液，包括有機溶液（如DMSO，甲醇）。減少交叉污染，確保數(shù)據(jù)完整性。

固定鋼針或者吸頭可探測或追蹤液面位置 （放大）

如圖一所示：微量體積移液時，在不同移液體積下，CV值的波動極小，重復性佳。

圖一：微量體積移液的重復性和穩(wěn)定性 （放大）

如圖二所示：大體積移液時，性均大于99%，CV波動性更小。自動化PCR體系構(gòu)建工作站移液范圍是0.5ul-5000ul。

圖二：大體積移液的重復性和性 （放大）

2. 基于系統(tǒng)液的液相驅(qū)動移液技術(shù)，一方面確保高精度移液，另一方面也避免了氣溶膠的污染（因可用系統(tǒng)液對整個液體管道和一次性吸頭適配器進行清洗）。在大部分的案例中，都能避免使用昂貴的帶濾芯的吸頭，而只用正常的標準吸頭。

二、靈活性突出，適用于復雜多變的應用場景

1. 移液分液靈活選擇

Varispan具有4通道或者8通道移液臂，可獨立探測液面并在Z軸獨立運動。各通道移液器之間的間距可自動調(diào)整，可操作試管、微孔板、深孔板和試劑瓶。同一移液臂，可進行靈活的多通道移液，提高了工作效率。以8通道移液臂為例，進行96 PCR板體系構(gòu)建，只需不到10分鐘，即可快速完成實驗。相比手工操作，實驗通量更高，也避免加樣錯誤的發(fā)生。

2. 可整合和擴展性

移板機械臂可同時整合循環(huán)擴增儀。微孔板放入、移出循環(huán)儀、微孔板移動到振蕩器、冷熱溫控、離心機等都可以實現(xiàn)自動化。

三、簡便易用且功能強大的操作軟件WinPREP

1. 預定義的實驗器具，簡化了實驗程序的建立；具有用戶使用向?qū)В芍笇в脩羰占嚓P(guān)實驗器具和試劑及位置擺放，儀器維護等。減少客戶對自動化的恐懼，實驗過程能被快速啟動和運行。節(jié)省更多的時間，確保實驗順利運行，獲得更好地實驗數(shù)據(jù)和穩(wěn)定性，這對于新的用戶尤其重要。

2. WinPREP 軟件具備調(diào)用應用程序、追蹤樣品制備過程，以及整合輔助設(shè)備的能力，以實現(xiàn)全自動化應用解決方案，滿足樣品在處理過程中的可追溯，可記錄。

3. 符合 21 CFR Part 11 相關(guān)法規(guī)規(guī)范，只有授權(quán)用戶才可以訪問設(shè)備，數(shù)據(jù)從生成的那一刻起自動保護，滿足數(shù)據(jù)安全性和溯源性要求。

兩個型號供您選擇

JANUS G3 自動化PCR體系構(gòu)建工作站實現(xiàn)靈活的無人看守的PCR反應建立, 減少技術(shù)人員的動手時間，減少人為錯誤，提高實驗穩(wěn)定性和重復性；同時也大大提高了工作通量和質(zhì)量。相信在不久的將來，JANUS G3 自動化PCR體系構(gòu)建工作站能夠在越來越多的應用中釋放能量，助力整個生物制藥產(chǎn)業(yè)逐步邁向自動化的進程。