海關(guān)總署：暫停中國臺灣石斑魚輸往大陸

去年以來，大陸海關(guān)多次從中國臺灣地區(qū)輸大陸石斑魚中檢出孔雀石綠、結(jié)晶紫禁用藥物，還檢出土霉素超標(biāo)。

為防范風(fēng)險，保護(hù)消費(fèi)者身體健康和生命安全，依據(jù)大陸相關(guān)法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)，海關(guān)總署決定自2022年6月13日起暫停中國臺灣地區(qū)石斑魚輸入大陸。

水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫

孔雀石綠是有毒的三苯甲烷類化合物，既是染料，也是殺真菌、殺細(xì)菌、殺寄生蟲的藥物，長期超量使用可致癌，無公害水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域國家明令禁止添加卻屢禁不止。

孔雀石綠的檢測可參照國標(biāo)《GB19857-2005水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留的測定》和《GB20361-2006水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留的測定高效液相色譜熒光檢測法》。其中GB19857-2005采用液質(zhì)方法對孔雀石綠和結(jié)晶紫含量分別進(jìn)行測定，加入內(nèi)標(biāo)進(jìn)行內(nèi)標(biāo)矯正。GB20361-2006法中加入硼氫化鉀將孔雀石綠和結(jié)晶紫的活潑雙鍵還原，分別形成隱形孔雀石綠和隱性結(jié)晶紫，最后再以熒光檢測二者的總量。孔雀石綠結(jié)構(gòu)中的雙鍵屬于活潑的反應(yīng)位點(diǎn)，常常容易發(fā)生氧化或者去甲基化，導(dǎo)致測試孔雀石綠比較困難。

 

圖-1. 孔雀石綠和結(jié)晶紫的結(jié)構(gòu)式及相互轉(zhuǎn)化

本方法參考了上述方案的兩種國標(biāo)的前處理過程，采用不加入還原劑對樣品進(jìn)行前處理，加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)后采用中性氧化鋁固相萃取柱凈化目標(biāo)物，洗脫目標(biāo)物后濃縮經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用檢測4種目標(biāo)化合物。

儀器與耗材

1.儀器

?？艶otector Plus高通量全自動固相萃取儀

?？艫P 300 全自動液體樣品處理工作站

?？艫H 50全自動均質(zhì)器

?？艫uto EVA 80 高通量全自動平行濃縮儀

高效液相色譜 (HPLC) Agilent 1260

質(zhì)譜檢測器 (MS) Agilent 6410

2.耗材

中性氧化鋁固相萃取柱 (1g/3 mL)

3.試劑

甲醇（HPLC）；乙腈（HPLC）；水；5 mmol/L乙酸銨緩沖溶液：稱取0.385g 無水乙酸銨溶解于1000mL 水中，冰乙酸調(diào)pH到4.5；體積分?jǐn)?shù)為5％的乙酸銨甲醇溶液：量取5 mL乙酸銨緩沖溶液(5 mol/L)用甲醇定容至100 mL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

將1.0 µg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液和0.1 µg/mL的混合內(nèi)標(biāo)儲備液取出，于室溫平衡后用AP 300 全自動液體樣品處理工作站配成濃度為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 µg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

實(shí)驗步驟

1.樣品制備

鮮活水產(chǎn)品

稱取5.0g已搗碎的樣品于50 mL離心管中，加入200 μL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 ppb)，加入11 mL乙腈，用AH 50全自動均質(zhì)器以10000 r/min的速度勻漿提取30 s并洗滌刀頭, 4000 r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至25 mL試管中；殘渣加入乙腈后再提取一次，合并上清液至25 mL試管中，用乙睛定容至25.0 ml，搖勻備用。

2.樣品凈化

移取5.0 mL上述的樣品溶液加至已活化的中性氧化鋁柱，5mL乙腈洗滌樣品瓶，收集全部流出液，用EVA 80全自動氮吹濃縮儀在40 ℃條件下濃縮至約1 mL，用乙腈準(zhǔn)確定容至1.0 mL，再加入1 mL乙酸銨溶液（5 mmol/L）震蕩混勻，經(jīng)濾膜過濾后供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。具體的固相萃取方法見圖-2。

固相萃取條件

 

 

圖-2.Fotector Plus固相萃取方法

3.液質(zhì)檢測條件

 

4.MRM參數(shù)

 

Ps: 孔雀石綠和結(jié)晶紫采用D5-MG內(nèi)標(biāo)，隱性結(jié)晶紫和隱性孔雀石綠采用D5-LMG內(nèi)標(biāo)。

結(jié)果與討論

為了驗證該方法的回收率，本實(shí)驗向鱸魚樣品(5 g)中加入上述4種化合物標(biāo)準(zhǔn)品(20 μL, 1 mg/L)和2種氘代孔雀石綠和氘代隱性孔雀石綠(200 μL, 0.1 mg/L)作為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行加標(biāo)回收驗證(n=3)。數(shù)據(jù)如表-2所示：四種目標(biāo)化合物的加標(biāo)回收率均在90-110%之間，RSD值控制在6%以內(nèi)。說明該方法能夠很好地運(yùn)用于水產(chǎn)品樣品中孔雀石綠和結(jié)晶紫的檢測。

 

表-2. 鮮活水產(chǎn)品的加標(biāo)回收率及RSD值(2 μg/kg)

總結(jié)

本文采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行定性和定量測定，前處理過程使用Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀進(jìn)行凈化，準(zhǔn)確性和平行性均滿足實(shí)驗要求；從活化到上樣、洗脫一步到位，一天最多能夠處理180個樣品，操作方便快捷，效率高。

AP 300全自動液體樣品處理工作站能夠?qū)崿F(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備、樣品添加和分液等液體樣品處理功能，無需人員值守，程序化運(yùn)行有效避免人為誤差，提高精密性的同時極大地減輕工作量，保護(hù)實(shí)驗人員的身體健康。