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 Camtag蛋白小鼠單克隆抗體

受歡迎的加載控制 ATP1A1(Na，K-ATP 酶 α1) β 肌動(dòng)蛋白和 β 微管蛋白 COX IV 和 VDAC1GAPDHHistone H3和 Lamin B1ProductsAnti-β 肌動(dòng)蛋白小鼠 mAb 加載控制目錄號(hào) AT0001測(cè)試應(yīng)用程序 WB: 1/1000。預(yù)測(cè)分子量: 42kDa。尚未在其他應(yīng)用程序中測(cè)試。最佳稀釋度/濃度應(yīng)由最終用戶確定。反應(yīng)性小鼠，大鼠，人

抗β-肌動(dòng)蛋白小鼠單克隆抗體加載控制目錄編號(hào): AT0001Actin 是一種普遍存在的真核蛋白，是細(xì)胞骨架的主要組成部分。哺乳動(dòng)物中至少有六種同種型。非肌肉 β-肌動(dòng)蛋白和 γ-肌動(dòng)蛋白也稱為細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白，主要在非肌肉細(xì)胞中表達(dá)，控制細(xì)胞結(jié)構(gòu)和運(yùn)動(dòng)。Α-心肌肌動(dòng)蛋白和 α-骨骼肌肌動(dòng)蛋白分別在橫紋心肌和骨骼肌中表達(dá)，平滑肌肌動(dòng)蛋白 α-和 γ-肌動(dòng)蛋白分別主要存在于血管平滑肌和腸平滑肌中。

大小: 100μL 濃度: 1毫克/毫克可用性: 庫(kù)存概述/小鼠對(duì) β-肌動(dòng)蛋白的單克隆抗體[7G6]-加載控制反應(yīng)性小鼠，大鼠，人體測(cè)試應(yīng)用/WB: 1/1000。預(yù)測(cè)分子量: 42kDa。尚未在其他應(yīng)用程序中測(cè)試。最佳稀釋度/濃度應(yīng)由最終用戶確定。產(chǎn)品圖片這種抗體檢測(cè)內(nèi)源性 β-肌動(dòng)蛋白水平。單克隆號(hào): 7G6同種型小鼠 IgG1Form 液，1mg/mL 小鼠單克隆免疫球蛋白100μg，pH7.3(+/-0.1) ，50% 甘油，0.1 mg/mL BSA (IgG，無(wú)蛋白酶)作為穩(wěn)定劑，0.02% 氮化鈉作為防腐劑。貯存指引短期(1-2星期)貯存在攝氏4度以下。配料及貯存在攝氏零下20度，避免冷凍/解凍循環(huán)。數(shù)據(jù)庫(kù)鏈接 SwissProt: P60709 Human，SwissProt: P60710 Mouse，SwissProt: P60711 RatHostMouse 所有泳道: 1:1000泳道的抗 β 肌動(dòng)蛋白抗體1: HelaLanes2: NIH3T3Lanes3: PC-12推薦的二抗: 山羊抗小鼠 IgG-HRP (Engibody，目錄號(hào): AT0098)推薦的 ECL: ECL Pico-DetectTM Western 化學(xué)發(fā)光 HRP 底物(Engibody，目錄號(hào): IF6747) 在0.5 mL 冰冷的細(xì)胞裂解緩沖液中裂解大約107個(gè)細(xì)胞(下面提供的制劑)。該緩沖液是一種修飾的 RIPA 緩沖液，適用于回收大多數(shù)蛋白質(zhì)，包括膜受體、細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白和可溶性蛋白。這種細(xì)胞裂解緩沖制劑可作為一個(gè)單獨(dú)的產(chǎn)品，需要補(bǔ)充蛋白酶抑制劑立即使用前(貓。# FNN0011，溫度計(jì))。其他細(xì)胞裂解緩沖液制劑，如 Laemmli 樣品緩沖液和 Triton-X 100緩沖液，也與本程序兼容。對(duì)于每個(gè)特定的應(yīng)用，可能需要對(duì)細(xì)胞刺激方案和細(xì)胞裂解過(guò)程進(jìn)行額外的優(yōu)化。將裂解物以14,000 x g 離心10分鐘，清除細(xì)胞碎片?；蛘?，裂解物可以在100,000 x g 下超離心30分鐘以獲得更大的澄清。小心地將澄清的細(xì)胞裂解物倒入干凈的試管中，并用合適的方法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，如布拉德福德試驗(yàn)。建議使用聚丙烯管儲(chǔ)存細(xì)胞裂解物。用等體積的2xLaemmli 樣品緩沖液(125mM Tris，pH6.8,10% 甘油，10% sDS，0.006% 溴酚藍(lán)和130mM 二硫蘇糖醇[ dTT ])反應(yīng)裂解物的等分試樣，并在100 °C 下將混合物煮沸90秒。將10 ~ 30μg 的細(xì)胞裂解物加入適當(dāng)?shù)膯我话俜直然蛱荻任⒛z孔中，用 SDS-PAGE 電泳分離蛋白質(zhì)。在準(zhǔn)備西藥轉(zhuǎn)移時(shí)，切一塊比凝膠稍大的 PVDF。膜在甲醇中浸泡1分鐘，然后用 DDH2O 沖洗5分鐘?；蛘?，可以使用硝化纖維素。在轉(zhuǎn)移緩沖液(配方如下)中浸泡薄膜、2片 Whatman 紙和 Western 儀器海綿2分鐘。將凝膠和薄膜組裝到夾層裝置中。將蛋白質(zhì)以140mA 的溫度在室溫下轉(zhuǎn)移6 ° C 0-90分鐘。轉(zhuǎn)移后，用 Tris 緩沖鹽水沖洗膜2分鐘。用封閉緩沖液(配方如下)在4 °C 下封閉膜過(guò)夜，或在室溫下封閉膜一小時(shí)。在補(bǔ)充有1% 無(wú) Ig BSA 和0.1% 吐溫 -20的 Tris 緩沖鹽水中以1:1000起始稀釋度將封閉的印跡與一抗在4 °C 孵育過(guò)夜或在室溫下孵育2小時(shí)。用添加0.1% 吐溫20的 Tris 緩沖鹽水洗滌印跡。使用合適的第二抗體，如山羊抗兔 IgG 結(jié)合的 HRP (Cat。# AT0097-100ul，Engibody)或山羊抗小鼠 IgG 結(jié)合 HRP (Cat。# AT0098-100ul，Engibody)與您的化學(xué)發(fā)光試劑和儀器一起使用。故障排除指南西部印跡故障排除1。沒(méi)有信號(hào)。高背景3。非特定波段4。波段大小錯(cuò)誤5。黑色/灰色污點(diǎn)上的白色條紋6。“抹黑”1。故障排除: 無(wú)信號(hào)樣品準(zhǔn)備•未經(jīng)測(cè)試的物種？積極控制。檢查校準(zhǔn)。?樣本中或凝膠上的抗原不足。轉(zhuǎn)移到膜上•轉(zhuǎn)移不良。?過(guò)度清洗。阻塞•太多阻塞。優(yōu)化封閉劑、濃度和時(shí)間•交叉反應(yīng)封閉劑/抗體?？贵w孵化和檢測(cè)•抗體不足。?第二抗體不正確。•檢測(cè)試劑盒舊基質(zhì)無(wú)效。膜的選擇。阻塞•需要阻塞更長(zhǎng)時(shí)間。•優(yōu)化封堵劑、濃度。•封閉劑與一級(jí)或二級(jí)封閉劑之間的交叉反應(yīng)。?磷酸化特異性蛋白質(zhì): 使用酪蛋白阻斷?？贵w孵化和檢測(cè)•一級(jí)抗體濃度過(guò)高。?孵化溫度過(guò)高。細(xì)胞系可以積累不同的蛋白質(zhì)表達(dá)譜。•蛋白質(zhì)有多種修飾形式，改變了流動(dòng)性。目標(biāo)蛋白質(zhì)成片段-被蛋白酶降解或切割。•剪接變體/同種型或可能來(lái)自同一家族的蛋白質(zhì)。?蛋白質(zhì)的多聚體(二聚體)(還原和變性)。•樂(lè)隊(duì)可能不是特定的。運(yùn)行無(wú)主控制阻塞•阻塞不足。優(yōu)化注意力，時(shí)間。抗體孵化和檢測(cè)•一級(jí)或二級(jí)抗體濃度過(guò)高。抗體尚未提純。除非在數(shù)據(jù)表中另有說(shuō)明，否則確保樣品被減少和變性。•檢查異構(gòu)體。•樣本是否為重組片段？這些將運(yùn)行在不同的大小。過(guò)多的一抗和/或過(guò)多的二抗。超載，蛋白質(zhì)降解。

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