Universal通用植物總RNA提取試劑盒的使用提取步驟

來源：北京眾仁鑫商貿(mào)有限公司 2022年11月11日 14:29

通用植物總RNA提取試劑盒適用于普通植物組織細(xì)胞的總RNA提取。采用裂解液可以迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，結(jié)合多次柱漂洗的方式，可提取沒有蛋白、細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)污染的高純度、高質(zhì)量的總RNA。

提取步驟：

1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物分離。

2.可選步驟：12,000rpm離心10分鐘，小心取上清轉(zhuǎn)入一個新的RNase free的離心管中。（當(dāng)樣品富含多糖或是植物的塊莖部分時可能需要此額外的分離步驟）。

3.每1ml裂解液RL加200μl氯仿。蓋緊樣品管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫靜置3分鐘。

4.在4°C12,000rpm離心10分鐘，樣品會分成三層：下層有機(jī)相，中間層和上清水相，RNA存在于上清水相中。把上清水相轉(zhuǎn)移到新管中（不要觸碰中間層）。

5.加入上清水相0.5倍體積的無水乙醇，立即吹打混勻。

6.轉(zhuǎn)入套有收集管的吸附柱RA中，12,000rpm 離心45秒，棄掉廢液。

7.加500μl去蛋白液RE，12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。

8.加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。

9.重復(fù)步驟7次。

10.將吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

11.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加50 ~ 80μl RNase-free H2O，室溫靜置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘，取得RNA后，將RNA溶液保存在－80°C，防止降解。

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