液相色譜分析,如何高效解決“煩人“的溶劑效應(yīng)
溶劑效應(yīng)(solvent effect)亦稱“溶劑化作用”,指液相分析中,溶劑的物理和化學(xué)性質(zhì)影響反應(yīng)平衡和反應(yīng)速度的效應(yīng),可能造成色譜峰展寬、分叉、保留時(shí)間漂移、峰面積變化,雙峰等現(xiàn)象。與此同時(shí),較早洗脫的峰出現(xiàn)前延或分叉。
產(chǎn)生溶劑溶劑效應(yīng)后,我們常見的解決辦法是用流動(dòng)相溶解樣品或減小進(jìn)樣量。可是,用流動(dòng)相溶解樣品真的是解決溶劑效應(yīng)的好辦法嗎?下面分別以制藥和食品檢測(cè)領(lǐng)域的兩位客戶的真實(shí)案例來(lái)闡述。
案例一:藥企碰到的液相色譜困境
某制藥企業(yè)生產(chǎn)的塞來(lái)昔布,是目前全球處方量最大的非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥(NSAIDs)。企業(yè)參考美國(guó)藥典論壇方法,建立了塞來(lái)昔布雜質(zhì)D的HPLC-UV測(cè)定法,對(duì)塞來(lái)昔布膠囊中可能存在的雜質(zhì)D進(jìn)行檢測(cè),可以更好的控制塞來(lái)昔布及其制劑的產(chǎn)品質(zhì)量。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
參考美國(guó)藥典色譜條件,在液相色譜儀上進(jìn)樣雜質(zhì)D對(duì)照品溶液,結(jié)果顯示雜質(zhì)D峰出現(xiàn)峰前延。
考慮到樣品配制用溶劑和流動(dòng)相不一致,存在樣品溶液與流動(dòng)相的兼容性問(wèn)題,可能引起溶劑效應(yīng)。為證明溶劑效應(yīng)的存在,改用流動(dòng)相稀釋雜質(zhì)D對(duì)照品溶液,在相同儀器上重新進(jìn)樣,結(jié)果顯示雜質(zhì)D峰形正常。
用流動(dòng)相溶解樣品,帶來(lái)的困擾
表面上,采用流動(dòng)相溶解樣品后,“煩人”的溶劑效應(yīng)問(wèn)題解決了。可是,卻給企業(yè)帶來(lái)了新困擾?
困擾1:藥典或國(guó)標(biāo)等部門制定的方法不能隨意改變,更換樣品溶劑通常認(rèn)為是對(duì)方法的改變,一般不被允許,如要改變,必須通過(guò)一系列復(fù)雜的方法學(xué)驗(yàn)證之后才可以。
困擾2:塞來(lái)昔布雜質(zhì)D對(duì)照品價(jià)格極其昂貴,100mg近萬(wàn)元,改為用流動(dòng)相溶解樣品后,由于流動(dòng)相中有水,配置的標(biāo)準(zhǔn)品極易長(zhǎng)菌,保質(zhì)期非常短,而且樣品不穩(wěn)定。這樣企業(yè)需要頻繁的配置,會(huì)造成標(biāo)準(zhǔn)品的浪費(fèi),檢測(cè)成本也無(wú)形中提高了。
困擾3:改為用流動(dòng)相溶解樣品后,原本一年才配置一次標(biāo)準(zhǔn)曲線,現(xiàn)在不到半個(gè)月就需要配置一次。原本已經(jīng)飽滿的實(shí)驗(yàn)室工作,現(xiàn)在又額外增加不少工作量,勞心費(fèi)力。
溶劑效應(yīng)消除器,小配件大作用
使用溶劑效應(yīng)消除器后,沒想到,幾千元的小配件(可以使用3-5年,每天不到1元錢),解決了藥企的煩惱,不用改變色譜條件,而且解決了溶劑效應(yīng)問(wèn)題。
將溶劑效應(yīng)消除器接于液相色譜進(jìn)樣器與色譜柱之間,參考美國(guó)藥典論壇色譜條件進(jìn)樣雜質(zhì)D對(duì)照品溶液。結(jié)果顯示雜質(zhì)D峰形正常。
注:圖譜來(lái)源于廣州匯元醫(yī)藥科技有限公司
注:以上僅是眾多藥物分析中一個(gè)案例。我們翻看2020版中國(guó)藥典,不少品種(比如:2020版二部P630 妥布霉素),為避免分析中出現(xiàn)溶劑效應(yīng),不得已采取了流動(dòng)相或純水溶解,
有了溶劑效應(yīng)消除器后,就可以使用保存期更長(zhǎng)或溶解性更好的甲醇或乙腈來(lái)溶解,就可以避免上述藥企出現(xiàn)的困境。
案例二:氮吹溶劑置換,帶來(lái)的困擾
氮吹溶劑置換,帶來(lái)的困擾
困擾1:國(guó)標(biāo)的前處理過(guò)程非常繁瑣,樣品提取后,45℃氮吹,由于有機(jī)磷農(nóng)藥易揮發(fā),溫度不能太高,氮吹時(shí)間差不多2-3小時(shí)。如此漫長(zhǎng)的氮吹,實(shí)在無(wú)法忍受。(注:樣品中有機(jī)磷農(nóng)藥的含量比較高,之所以需要氮吹,主要目的是為了溶劑置換,避免分析過(guò)程中的溶劑效應(yīng))
困擾2:氮吹不能全吹干,否則有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率受到較大影響??墒牵?/span>吹至近干,一方面時(shí)間非常不好控制,快到最后一些時(shí),需密切關(guān)注氮吹過(guò)程。另一方面,即使吹至是近干,還是一部分有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率會(huì)受到一些影響。
溶劑效應(yīng)消除器,省去了漫長(zhǎng)的氮吹
加裝溶劑效應(yīng)消除器后,大大的簡(jiǎn)化了前處理步驟,無(wú)需溶劑置換,可省去氮吹過(guò)程(2-3小時(shí)),過(guò)濾膜后直接進(jìn)樣。而且,部分有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率較大提高了。
有了溶劑效應(yīng)消除器神器后,客戶在后續(xù)的一個(gè)課題中,還應(yīng)用了溶劑效應(yīng)消除器發(fā)表了一篇不錯(cuò)的文章(文章發(fā)表中,暫不透露)
省去氮吹,過(guò)濾膜后直接進(jìn)樣的對(duì)比圖
注:以上圖譜來(lái)源于某國(guó)家檢測(cè)單位
注:如果在分析中用流動(dòng)相溶解樣品不好,只能使用純甲醇或純乙腈來(lái)溶解樣品,此時(shí)更應(yīng)使用溶劑效應(yīng)消除器,解決分析中溶劑效應(yīng)的問(wèn)題。
比如:最近比較熱的全氟化合物的分析,用流動(dòng)相溶解樣品后,發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈化合物基本沒有響應(yīng),經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn),才發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈PFAS用流動(dòng)相溶解不好,改為純甲醇后,能實(shí)現(xiàn)充分溶解??墒?,上機(jī)分析時(shí),又出現(xiàn)明顯的溶劑效應(yīng)問(wèn)題。此時(shí),加裝溶劑效應(yīng)消除器后可較好解match決這個(gè)問(wèn)題。
溶劑效應(yīng)消除器
歷時(shí)5年潛心打磨和研發(fā)的新產(chǎn)品,可有效解決樣品溶劑與流動(dòng)相匹配性不好而產(chǎn)生的各類色譜問(wèn)題:
大程度降低樣品溶劑和流動(dòng)相差異所產(chǎn)生的色譜分析問(wèn)題
顯著改善峰形、提高柱效
色譜基線更平穩(wěn)、出峰時(shí)間更穩(wěn)定
提高分離度和雜質(zhì)檢出能力
(譜寧發(fā)明zl,zl號(hào): 201510005647.8)
相關(guān)產(chǎn)品
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