DNA條帶模糊

DNA降解

實(shí)驗(yàn)過程避免核酸酶污染

電泳緩沖液陳舊

電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，PH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。TBE建議使用10次就更換緩沖液

所用電泳條件不合適

電泳時電壓不應(yīng)超過6V/CM，溫度＜30℃，巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換

DNA上樣量過多

減少凝膠中DNA上樣量

DNA含鹽過高

電泳前通過乙醇沉淀去除多余鹽分

有蛋白污染

電泳前酚抽提去除蛋白

DNA變性

電泳前勿加熱，用TE緩沖液稀釋DNA

出現(xiàn)片狀拖帶或涂抹帶

PCR擴(kuò)增有時出現(xiàn)涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往PCR體系需要優(yōu)化，PCR程序需要摸索。

其對策有：調(diào)整PCR體系和PCR程序，摸索出合適的條件。

不規(guī)則DNA帶遷移

電泳條件不合適

電泳時電壓不應(yīng)超過6V/CM，溫度＜30℃，巨大DNA鏈電泳，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液的緩沖能力，注意經(jīng)常更換

DNA變性

電泳前勿加熱，用TE緩沖液稀釋DNA

帶弱或無DNA帶

DNA上樣量不夠

增加DNA上樣量，聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度高，上樣量可適當(dāng)降低

DNA降解

實(shí)驗(yàn)過程避免核酸酶污染

DNA跑出凝膠

縮短電泳時間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度

EB染色的DNA，所用光源不合適

應(yīng)用短波長（254nm）的紫外光源

DNA帶缺失

DNA跑出凝膠

縮短電泳時間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度

分子大小相近的DNA帶不易分辨

增加電泳時間，核準(zhǔn)正確凝膠濃度

DNA變性

電泳前勿加熱，用20mM Nacl 緩沖液稀釋DNA

DNA鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適

在脈沖凝膠電泳上分析

電泳時Ladder扭曲

配膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時配置

同時配置，電泳緩沖液高出液面1-2mm即可

電泳時電壓過高

電泳時電壓不應(yīng)超過6V/CM