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PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理及比較

來(lái)源:柏萊源(天津)生物科技有限公司   2023年11月02日 22:18  

目前,將外源 DNA 導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法大致可分為兩大類(lèi),即生物方法和物理化學(xué)方法。生物方法主要以病毒作為載體,通過(guò)病毒感染的方式將外源 DNA 導(dǎo)入到細(xì)胞中,其中以逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)最為常用。物理化學(xué)方法中常用的有磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、顯微 注射、電穿孔,以及最近出現(xiàn)的以高分子聚合物為載體的基 因傳遞技術(shù)。其中常用的是化學(xué)方法,磷酸鈣、聚乙烯亞胺(PEI)、脂質(zhì)體等化學(xué)試劑較為常用,那么接下來(lái)著重探討一下PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理及比較吧。

PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理

使用泛的陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑是PEI。PEI制備簡(jiǎn)單,價(jià)格便宜,有線(xiàn)狀和枝狀兩種商業(yè)試劑可選。自19世紀(jì) 70年代發(fā)現(xiàn)PEI可以結(jié)合DNA質(zhì)粒,直到20年后,PEI才真正用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染,成為非常有潛力的非病毒質(zhì)粒載體試劑。由于PEI帶正電荷,與帶負(fù)電荷的DNA結(jié)合形成帶正電荷的PEI-DNA復(fù)合物,可以與帶負(fù)電荷的細(xì)胞表面結(jié)合。PEI-DNA復(fù)合物通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部形成內(nèi)涵體,之后一部分從內(nèi)涵體中逃逸進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),未逃逸的進(jìn)入溶酶體被降解,無(wú)法入核的DNA會(huì)在100min內(nèi)被胞漿中的DNA酶降解(如下圖)。每毫升轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)?;旌衔镄纬杉s1×1010個(gè)DNA/PEI復(fù)合物,大小為300nm左右。經(jīng)過(guò)15min孵育,轉(zhuǎn)染時(shí)每個(gè)細(xì)胞進(jìn)入約250個(gè) DNA/PEI 復(fù)合物。

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不同 PEI 的比較

枝狀的800kD PEI是shou次報(bào)道的可用于多種細(xì)胞轉(zhuǎn)染的試劑,枝狀的25kD PEI(25B)用于HEK293細(xì)胞大規(guī)模瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,其轉(zhuǎn)染效率較枝狀2kD、600kD、800kD 或線(xiàn)狀22kD PEI(22L)的高。 之后比較了枝狀70kD、50 ~ 100 kD、25kD PEI和線(xiàn)狀25 kD PEI(25L),結(jié)果表明25B和25L的轉(zhuǎn)染效率較高,適合于哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染,但是 25L比25B更適用于懸浮哺乳動(dòng)物細(xì)胞HEK293和CHO轉(zhuǎn)染。

polysciences轉(zhuǎn)染試劑

成立于1961年的美國(guó)Polysciences公司,是一家歷史久遠(yuǎn)的化學(xué)品制造公司,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個(gè)科研領(lǐng)域。Polysciences在PEI的制造工藝上具有長(zhǎng)達(dá)20多年的經(jīng)驗(yàn),其經(jīng)典的PEI產(chǎn)品系列包括研究級(jí)產(chǎn)品PEI 25K,PEI MAX和Transporter 5,以及cGMP級(jí)MAXgene GMP(Figure 1),被廣泛用于抗體藥物和重組蛋白,臨床等級(jí)慢病毒和AAV病毒的大規(guī)模生產(chǎn),為全球客戶(hù)提供成本效益高、供應(yīng)穩(wěn)定和質(zhì)量可靠的選擇。在過(guò)去10年期間,相關(guān)產(chǎn)品已被用于國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)臨床申報(bào)。

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我司提供Polysciences品牌以下試劑:


貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

庫(kù)存

23966-1

Polyethylenimine, Linear(MW25,000)

1G

現(xiàn)貨

24765-1

Polyethylenimine Max (Mw 40,000)

1G

現(xiàn)貨







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