1. 產(chǎn)品照片 (包括管壁的批次號、管底的二維碼的清晰照片)

2. 請?zhí)峁┠膶?shí)驗(yàn)結(jié)果并描述出現(xiàn)的問題

注意：

· 請?jiān)诮Y(jié)果圖片中標(biāo)注準(zhǔn)確的蛋白marker位置和大小，并標(biāo)注每個(gè)泳道的樣品信息；

· 請附上內(nèi)參蛋白的檢測結(jié)果；

· 請用文字語言準(zhǔn)確地描述實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題。

目標(biāo)蛋白出現(xiàn)了兩至三條蛋白條帶，且MDA-MB-231細(xì)胞中有表達(dá)psma蛋白，但pc3細(xì)胞應(yīng)該低表達(dá)甚至不表達(dá)psma蛋白，卻出現(xiàn)了假陽。

3. 產(chǎn)品儲存 (溫度和分裝)

· 儲存溫度: -20攝氏度

· 是否進(jìn)行分裝及分裝后每管的體積: 未進(jìn)行分裝

4. 檢測的樣品

· 樣品種屬信息（Human/Mouse/Rat etc.）：Human

· 如果檢測樣品為細(xì)胞系，請?zhí)峁┘?xì)胞系名稱：mda-mb-231細(xì)胞，pc3細(xì)胞

· 如果檢測樣品為組織，請?zhí)峁┙M織名稱：

· 是全細(xì)胞裂解液還是某一亞細(xì)胞組分裂解液：全細(xì)胞裂解液

5. 裂解液

· 上樣的蛋白總量（μg/lane）： 10-15μg

· 裂解緩沖液類型： RIPA裂解液

· 蛋白酶抑制劑：磷酸酶抑制劑混合物，蛋白酶抑制劑混合物

上樣緩沖液成分：


· 煮樣溫度和時(shí)間：100攝氏度，10min

6. 電泳和轉(zhuǎn)膜

電泳 ：

· 使用變性膠（SDS-PAGE）還是native膠（native-PAGE）：SDS-PAGE

· 分離膠濃度：8%

轉(zhuǎn)膜：

· 轉(zhuǎn)膜方法（濕轉(zhuǎn)/半干轉(zhuǎn) etc.）：濕法

· 轉(zhuǎn)膜電流/電壓和轉(zhuǎn)膜時(shí)間：300mA，2h

· 是否用麗春紅染色檢查過轉(zhuǎn)膜效率？若有，請?zhí)峁?shí)驗(yàn)圖片：否

7.  封閉條件

· 封閉劑成分（脫脂牛奶/BSA etc.）和濃度：5%脫脂牛奶

· 封閉時(shí)間和溫度：室溫，2h

8.  一抗

· 一抗稀釋比例：1:1000

· 抗體稀釋液：TBST

· 孵育時(shí)間和溫度：4攝氏度，10-12h

· 洗液成分（請注明Tween的含量）：TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具體步驟：每次10min，洗3次

9.  二抗

· 產(chǎn)品名稱：Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HRP

· 品牌與貨號：南京翼飛雪生物科技有限公司  YFSA02

· 二抗稀釋比例：1:5000

· 孵育時(shí)間和溫度：室溫，2h

· 洗液成分（請注明Tween的含量）:TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具體步驟：每次10min，洗3次

· 是否與其它一抗搭配使用沒有問題? 如果是， 請?zhí)峁┫嚓P(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與其它一抗搭配使用沒有問題

是

10. 檢測

· ECL/ECL+/其它檢測方法-請說明：ECL

11. 是否使用陽性對照與陰性對照? 如果是，請?zhí)峁┫嚓P(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

12. 請確認(rèn)靶標(biāo)蛋白在所檢測樣本中的表達(dá)情況，并提供相關(guān)參考文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫信息。

The Potential of PSMA as a Vascular Target in TNBC.

13. 是否用過其它同指標(biāo)產(chǎn)品? 如果是，請?zhí)峁┢放?、貨號與實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

無

14. 優(yōu)化步驟

· 您使用該投訴產(chǎn)品進(jìn)行過幾次WB：兩次

· 是否每次都遇到相同問題（例如每次背景條帶都在相同位置）：是的

· 您已經(jīng)優(yōu)化過哪些步驟：延長封閉時(shí)間

廠家郵件回復(fù):

1. 建議嘗試更換封閉液，比如用5%BSA進(jìn)行封閉:

2. 建議做一個(gè)不孵一抗、只二抗的陰性對照，檢測二抗與樣本是否存在非特異性結(jié)合

客戶重新按照廠家的建議做的結(jié)果基本符合實(shí)驗(yàn)要求，售后處理結(jié)束。