BMSCs常見的分離方法有密度梯度離心法、貼壁法以及免疫磁珠分選法，大家可以根據(jù)自己實驗室條件來選擇合適的分離方法。

將裝有大鼠骨髓液的15 mL離心管，1500 rpm離心5 min；棄上清，用完-全培養(yǎng)基重懸沉淀；將培養(yǎng)基重懸的細胞懸液緩慢滴加到Percoll分離液（用PBS稀釋）上方，形成密度梯度分離液；2000~2500 rpm離心25 min，吸取中間層的白色霧狀細胞層，加入PBS清洗細胞，1800 rpm離心5 min；棄上清，保留細胞沉淀；用細胞完-全培養(yǎng)基重懸沉淀，將細胞懸液按1×10⁶/mL密度接種于T25瓶中，于37℃，5%CO₂恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。首-次2 d換液，棄去未貼壁細胞, 此后每2~3 d換液一次；待細胞融合達80%后, 用胰酶消化1~2 min后傳代培養(yǎng)。

也稱全骨髓培養(yǎng)法或一步法。將收集的骨髓懸液經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾后，用完-全培養(yǎng)基制成單細胞懸液；培養(yǎng)48 h首-次換液，棄去未貼壁細胞；此后每2~3 d換液一次，觀察細胞的生長及融合程度，待細胞融合80%以上后開始傳代培養(yǎng)。

免疫磁珠法和流式細胞儀分選法通過識別細胞表面特異性抗原分離細胞，可獲得純度較高的細胞，但對細胞的活性影響較大，獲得的細胞量少，需要特殊的儀器，實際應(yīng)用受限。