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介紹一種提高慢病毒回收率與純化效率的新技術(shù)

來源:北京西美杰科技有限公司   2024年03月14日 10:32  

病毒載體技術(shù)的研究不斷深入和發(fā)展,為遺傳物質(zhì)遞送提供了理想的工具,成為目前細(xì)胞治療與基因治療的主要遞送技術(shù)。然而,研究人員在細(xì)胞基因治療產(chǎn)品的純化工藝方面卻面臨著重大挑戰(zhàn)。目前的純化工藝大都來源于為單克隆抗體開發(fā)的解決方案,不適合用于病毒載體的純化。而基于傳統(tǒng)樹脂色譜法有明顯的局限性,如回收率低、耗時且成本高。

AstreAdept™ 是一種新型的納米纖維材料,可有效解決粒徑大且脆弱的病毒顆粒純化面臨的耗時長、回收率低且雜質(zhì)含量高等問題。在這里,我們展示了該技術(shù)整合到離心管形式的Nereus LentiHERO™,并將其優(yōu)勢帶到實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的病毒載體純化中。

 

高瞬時結(jié)合表面積,更高效地處理慢病毒載體
AstreAdept™采用兩種不同的電紡材料(纖維素:575nm(+/- 50 nm)和非纖維素:200nm(+/- 50 nm))交織形成特性*的復(fù)合膜結(jié)構(gòu),可使產(chǎn)物溶液在高流速條件下快速擴(kuò)散到高結(jié)合表面積(圖1),實(shí)現(xiàn)wu阻礙的進(jìn)入孔道。將該技術(shù)整合到層析純化基質(zhì)的LentiHEROTM將慢病毒純化帶入一個新的紀(jì)元。

1.  AstreAdept™ 新型的復(fù)合納米纖維材料解決脆弱大分子純化的瓶頸問題。

wu阻礙液體流動系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn):


  • 結(jié)合表面積更大

  • 高回收率

  • 高流速


 

Nereus LentiHERO™ 用于慢病毒純化

2. Nereus LentiHERO™ 僅需5步離心即可實(shí)現(xiàn)慢病毒快速純化

 

 

Nereus LentiHERO™顯著提高慢病毒回收率

高動態(tài)結(jié)合載量與高回收率,提升實(shí)驗(yàn)室規(guī)模慢病毒生產(chǎn)效率。

3. 15%穿透時,每根離心柱的動態(tài)結(jié)合載量1.9E+10。 Nereus LentiHERO™離心柱以20 mv/min的速度上樣,流穿收集在10mL液體中,使用p24 ELISA分析,基于上樣的總VP,計算VP穿透百分比。

 

4. 有無血清培養(yǎng)體系慢病毒回收率:純化后樣品中慢病毒/病毒原液%。

血清(-) n=3,血清(+)n=2

 

• 高流速條件下不影響動態(tài)結(jié)合載量

• 保留時間 < 1s

• 無血清培養(yǎng)體系LV回收率>60%

 

Nereus LentiHEROTM宿主細(xì)胞蛋白殘留降低95%以上
降低HCP殘留在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的樣品生產(chǎn)同樣重要,可顯著減少非必要的免疫反應(yīng)。

Nereus LentiHERO™純化的樣品

• 95% 宿主蛋白的去除

• 通過SDS-PAGE,洗脫液中檢測不到宿主蛋白

• 不論培養(yǎng)體系中有無血清,都能顯著去除宿主蛋白

5. Nereus LentiHEROTM可去除95% 以上宿主蛋白

 

Nereus LentiHEROTM對病毒結(jié)構(gòu)和感染效力影響很小

Nereus LentiHERO™ 純化后的慢病毒顆粒保持了原有的功能、形態(tài)和大小

• 重要結(jié)構(gòu)蛋白完整,如編碼了衣殼、基質(zhì)與核衣殼的Gag蛋白

• 慢病毒顆粒大小和形態(tài)無改變

• 純化后的慢病毒感染活力未降低

6. 通過WB、電鏡和細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)分別對比了Nereus LentiHERO™ 純化前后慢病毒結(jié)構(gòu)蛋白的完整性、顆粒形狀大小與感染活力均未受到顯著影響。

 

Nereus LentiHEROTM兼具了產(chǎn)量、純度和時間效益

• 一臺臺式離心機(jī)即可實(shí)現(xiàn)高通量病毒純化

• 宿主細(xì)胞蛋白去除的同時樣品洗脫體積減?。饪s)

• 高純度、小體積樣品的進(jìn)一步濃縮更節(jié)省時間

 

 

Nereus LentiHERO™ 性能總結(jié)

• 一種新型基于納米纖維膜的AstreAdept™ 技術(shù)為病毒載體純化工藝賦能

• 易于操作的設(shè)計,實(shí)現(xiàn)了功能性慢病毒顆粒的快速純化和高回收率

• 能顯著降低如宿主細(xì)胞蛋白(HCP)等雜質(zhì)的含量

• 可以同時處理多個樣品突破病毒載體開發(fā)樣品制備的瓶頸

 

7. LV 純化高得率,高通量,高純度,適用于小體積慢病毒樣本,操作時間短。

 

綜上所述,該技術(shù)提供了一種更具成本效益和時間效率的方案,提高研究人員對新型細(xì)胞和基因治療項(xiàng)目的開發(fā),助推新型生物治療藥物惠及廣大患者。

 

產(chǎn)品信息*

品名

貨號

規(guī)格

Nereus LentiHEROTM

NL100100

2 unit pack

*采用相同技術(shù)適用于工藝放大的LentiHERO® 1LentiHERO® 10預(yù)裝柱產(chǎn)品已上市,歡迎咨詢Astrea Bioseparations代理商北京西美杰科技有限公司。

 

Astrea Bioseparations1987年孵化自劍橋大學(xué),擁有超過30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn),是層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應(yīng)商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過21個生產(chǎn)工藝通過了FDAEMA的批準(zhǔn)。Astrea在希臘語中是星際少女的意思,象征著正義、純真、純潔和精確。使用Astrea Bioseparations這個名字體現(xiàn)了我們在工作中對純潔、精確和人性一如既往的關(guān)注。Astrea Bioseparations在全球擁有3個研發(fā)和生產(chǎn)基地,專注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù),解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時問題,實(shí)現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過程,符合當(dāng)今生物治療創(chuàng)新的需求。


 

北京西美杰科技有限公司是Astrea Bioseparations品牌在中國的一級代理商,北京西美杰是Astrea Bioseparations 代理,Astrea Bioseparations 中國代理,Astrea Bioseparations 北京代理,Astrea Bioseparations 總代理,Astrea Bioseparations 上海代理,,Astrea Bioseparations 西北代理,Astrea Bioseparations 西南代理,Astrea Bioseparations 東北代理,Astrea Bioseparations 華北代理,Astrea Bioseparations 華南代理,Astrea Bioseparations 華中代理,負(fù)責(zé)Astrea Bioseparations 在中國的相關(guān)業(yè)務(wù)。


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