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細(xì)胞電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)的主要影響因素有哪些?

來源:臺(tái)州賽瑞崔克生物技術(shù)有限公司   2024年05月10日 08:55  
1、細(xì)胞密度對電轉(zhuǎn)的影響
 
細(xì)胞系電轉(zhuǎn)的細(xì)胞密度最好在0.5M-2.0M/20ul,或2.5M-10M/100ul. 常用1M/20ul. PBMC直徑更小,細(xì)胞密度一般為1M-5M/20ul, 或5M-25M/100ul。細(xì)胞密度越高可以增加細(xì)胞間電流輔助,從而增加細(xì)胞的有效電轉(zhuǎn)面積。密度高時(shí)電壓需要稍微調(diào)高一些,所以電轉(zhuǎn)時(shí)細(xì)胞密度根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選定后盡量不要變化。
需要特別注意的地方:一個(gè)樣品加進(jìn)電擊管后,不要等候,馬上進(jìn)行電轉(zhuǎn),完成后再處理下一個(gè)樣品,不要把一批樣品全部加樣完成后再一起電轉(zhuǎn)。等候時(shí)間過長,細(xì)胞沉降也會(huì)導(dǎo)致電擊管內(nèi)上下細(xì)胞密度不均勻而降低電轉(zhuǎn)效率。電轉(zhuǎn)完成后細(xì)胞可以馬上取出培養(yǎng),也可以等全部樣品處理完畢再取出培養(yǎng)。
 
2、細(xì)胞聚團(tuán)對電轉(zhuǎn)的影響
 
當(dāng)細(xì)胞聚團(tuán)時(shí),其中只有一側(cè)細(xì)胞可以被電轉(zhuǎn),中間和另一側(cè)細(xì)胞不能被電轉(zhuǎn),降低電轉(zhuǎn)效率。所以消化細(xì)胞過程中注意細(xì)胞不要成團(tuán)。
 
3、溫度對電轉(zhuǎn)的影響
 
溫度對電轉(zhuǎn)影響也很大。一般室溫(23度)適宜進(jìn)行電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。溫度越低,需要電壓越高。4度電轉(zhuǎn)比室溫23度電轉(zhuǎn)大概需要增加3%到5%的電壓。所以為保證電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)性,需要將每次的電轉(zhuǎn)溫度保持一致。
 
4、DNA質(zhì)量對電轉(zhuǎn)的影響
 
DNA越純凈,越有利于電轉(zhuǎn)。DNA中雜質(zhì)較多時(shí),細(xì)胞毒性大,非常不利于電轉(zhuǎn)。市場上在售的品牌質(zhì)粒提取試劑盒一般都可以。DNA加得比較多時(shí),電轉(zhuǎn)效率呈線性遞增。但是電轉(zhuǎn)時(shí)DNA加的過高也會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性,電壓需要稍微下調(diào)。所以DNA濃度應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要相應(yīng)調(diào)整,濃度范圍一般在10ug/ml-200ug/ml。

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