檢測(cè)原理：Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸（PS）有高度親和力。在正常細(xì)胞中，PS通常位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)。然而，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，細(xì)胞膜的通透性會(huì)發(fā)生變化，細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的PS部分外翻，暴露到細(xì)胞膜外側(cè)。Annexin V可通過與凋亡早期細(xì)胞胞外翻的PS結(jié)合，從而識(shí)別凋亡細(xì)胞。為了更便于檢測(cè)，將Annexin V標(biāo)記上熒光染料，可通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡等設(shè)備檢測(cè)到帶有熒光的凋亡細(xì)胞。細(xì)胞核染料（PI、DAPI、7-AAD）可與雙鏈DNA特異性結(jié)合，并產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光。正常情況下大分子的核染料是無法透過細(xì)胞膜，由于凋亡晚期或壞死細(xì)胞膜喪失完整性，細(xì)胞核染料可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)對(duì)DNA進(jìn)行染色，與Annexin V搭配使用，可區(qū)分處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞。

檢測(cè)原理：在細(xì)胞凋亡的晚期，染色體DNA雙鏈斷裂產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端。在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，脫氧核糖核苷酸與熒光素等標(biāo)記物形成的衍生物可以被標(biāo)記到斷裂DNA的3'-末端，從而進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。

檢測(cè)原理：Caspase是一個(gè)蛋白酶家族，通常以無活性的酶原形式存在于細(xì)胞質(zhì)中?；罨腃aspase會(huì)破壞一些重要的胞內(nèi)蛋白，從而引發(fā)凋亡的發(fā)生。將Caspase序列特異性的多肽酶偶聯(lián)至黃色基團(tuán)pNA作為底物，當(dāng)Caspase被活化后，它能夠剪切這個(gè)底物，釋放出游離的黃色基團(tuán)。通過酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)測(cè)定這些黃色基團(tuán)的吸光值，就可以定量評(píng)估Caspase的活性，從而間接地監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡的情況。

檢測(cè)原理：在正常細(xì)胞中，線粒體膜電位通常較高，JC-1主要在線粒體基質(zhì)中聚集，以聚合體的形式存在，可產(chǎn)生紅色熒光。然而，在細(xì)胞凋亡的早期階段，線粒體膜電位會(huì)顯著降低，導(dǎo)致JC-1無法在線粒體基質(zhì)中積累，主要以單體形式存在，可產(chǎn)生綠色熒光。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可檢測(cè)到細(xì)胞膜電位的下降，可將JC-1熒光顏色的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的檢測(cè)指標(biāo)。

01

基于樣本類型選擇

02

基于實(shí)驗(yàn)儀器和配置選擇